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游离胆固醇(FC)检测试剂盒(COD-PAP双试剂比色法)
游离胆固醇(FC)检测试剂盒(COD-PAP双试剂比色法)图片
包装: 100T
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半岛bd体育手机客户端 介绍

胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇,是一种环戊烷多氢菲的衍生物,广泛存在于动物体内,其中脑、神经组织最丰富,在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高,用酶学方法测定游离胆固醇(FC)是生化检测中的常用方法,其特点是:1、灵敏度、准确度、精密度均高;2、使用温和的反应条件;3、操作简便;4、适用于自动分析仪。

游离胆固醇(FC)检测试剂盒(COD-PAP双试剂比色法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等,血液中的胆固醇约 1/3为游离胆固醇,2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯,后者被胆固醇酯酶(CEH)水解为游离胆固醇,游离胆固醇被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮,并产生过氧化氢,再经过氧化物酶(POD)催化,使 4-氨基安替比林与酚(三者合称 PAP)反应,生成红色醌亚胺色素(Trinder反应),当 CEH不存在时胆固醇酯不能被水解,因而只能检测到游离胆固醇的含量,分光光度计在 500~520nm处进行比色测定,盒用于定量测定人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的游离胆固醇含量。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。

半岛bd体育手机客户端 组成:

试剂(A): Good's溶液 Good's Buffer 2×25ml 4℃
显色剂 2×25ml 4℃
活性剂、稳定剂 2×25ml 4℃
试剂(B):COD-POD溶液 胆固醇氧化酶、 POD 2×25ml -20℃避光
4-氨基安替比林 2×25ml -20℃避光
临用前,按 A:B=1:1混合,即为 COD-PAP工作液,4℃保存。
试剂(C): FC标准(5mmol/L) 1ml -20℃避光
试剂(D): ddH2O 1ml RT
使用说明书 1份

自备材料:

1、生理盐水或 PBS

2、离心管、小试管或 96孔板

3、水浴锅或恒温箱

4、分光光度计或酶标仪

5、全自动或半自动生化分析仪

操作步骤(仅供参考):

1、样本处理:

①血清、血浆、脑脊液样本:从待测样本中分离出的血清或血浆不应有溶血,直接检测,如超过线性范围,用生理盐水稀释后检测。

②细胞样本:

a.取适量的细胞(一般推荐>106以上),1000g离心 10min,弃上清,留取沉淀。

b.用 PBS或生理盐水清洗 1~2次,1000g离心 10min,弃上清,留取沉淀。

c.加入 200~300μl的 PBS或生理盐水匀浆,冰浴条件下超声破碎细胞,功率 300W,每次3~5s,间隔 30s,重复 3~5次;亦可手动匀浆,制备好的匀浆液不可离心;亦可用 1~2% Triton X-100冰浴 30~60min,制备好的裂解液不可离心。

③组织样本:准确称取适量组织样本,按质量(g):生理盐水或 PBS(ml)=1:9的比例,加入生理盐水或 PBS,冰浴条件下手动或机械匀浆,2500~3000g离心 10min,取上清。

2、 FC测定

酶标仪、全自动生化分析仪 FC测定
加入物(μl) 空白孔 标准孔 待测孔
ddH2O 3 - -
TC标准(5mmol/L) - 3 -
待测样本 - - 3
COD-PAP工作液 300 300 300
分光光度计(1ml比色杯)、半自动生化分析仪 FC测定
加入物(ml) 空白管 标准管 待测管
ddH2O 0.01 - -
TC标准(5mmol/L) - 0.01 -
待测样本 - - 0.01
COD-PAP工作液 1 1 1
普通分光光度计(2ml比色杯)FC测定
加入物(ml) 空白管 标准管 待测管
ddH2O 0.02 - -
TC标准(5mmol/L) - 0.02 -
待测样本 - - 0.02
COD-PAP工作液 2 2 2

①各种半岛游戏平台官网入口网址 按上表依次加入试剂。充分混匀, 37℃水浴中孵育 5min。

②立即用相应半岛游戏平台官网入口网址 测定 500~520nm吸光度,以空白孔(管)调零,读取标准孔(管)、测定孔(管)的吸光度,分别记为 A标准、A测定。

机器参数:

主波长/次波长
500/600nm
反应类型 终点法
反应方向 升反应(+)

计算公式:

血清、血浆等液体样本(空白调零):

FC(mmol/L)= A测定/A标准×5

血清、血浆等液体样本(全自动生化分析仪):

FC(mmol/L)= (A测定- A空白)/(A标准- A空白)×5

组织样本(空白调零):

FC(mmol/g)= A测定/A标准×5×V2/(m×1000)

组织样本(全自动生化分析仪):

FC(mmol/g)= (A测定- A空白)/(A标准- A空白)×5×V/(m×1000)

细胞样本(空白调零):

FC(mmol/L)= A测定/A标准×5×V2/V1

细胞样本(全自动生化分析仪):

FC(mmol/L)= (A测定- A空白)/(A标准- A空白)×5×V2/V1

式中:

m=组织样本取样量(g)

V1=细胞样本取样量(ml)

V2=样本匀浆液总体积(ml)

参考区间:

【FC标准(5mmol/L)=442.48mg/dl】

健康成年人理想范围:<1.7mmol/L(<67mg/dl)

性能指标:

外观 无色至淡黄色澄清液体
线性范围 0.1~13mmol/L(3.6~500mg/dl),R2>0.95
灵敏度 检测下限 0.1mmol/L(3.6mg/dl)
变异系数 批内<3%,批间<5%
空白吸光值 <0.1(1cm光径)
干扰因素 胆红素<410 μ mol/L ;血红蛋白 <7g/L ;甘油三脂<28.5mmol/L时,对结果无明细影响。

注意事项:

1、上述低温试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降。

2、 COD-PAP工作液如不经常使用,应充分溶解后分装-20℃保存,可 4℃短期保存。

3、本法可直接用于检测脑脊液中的 FC含量,但不能直接检测尿液中的 FC含量,因为未经处理的尿液中含有还原性物质,影响过氧化物酶反应。

4、检测 FC的血清或血浆宜用 EDTA或肝素抗凝,如不能及时测定,密闭保存,4℃可稳定 1周,-20℃可以稳定半年以上。

5、本法线性范围可达 13mmol/L,如果样本 FC浓度过高,结果可能呈假性降低,应用生理盐水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。

6、该试剂盒既可作终点法检测,又可作速率法检测。

7、本法不适于检测总胆固醇的浓度,如需检测总胆固醇(TC)含量,请选择相关半岛bd体育手机客户端 。

有效期:6个月有效;4℃运输,-20℃保存。

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