胆固�?Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织最丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高，用酶学方法测定总胆固醇(Total Cholesterol，TC)是生化检测中的常用方法，其特点是�?、灵敏度、准确度、精密度均高�?、使用温和的反应条件�?、操作简便；4、适用于自动分析仪、�/span>

游离胆固�?FC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等，血液中的胆固醇� 1/3为游离胆固醇�?/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯，后者被胆固醇酯�?CEH)水解为游离胆固醇，游离胆固醇被胆固醇氧化�?COD)氧化成胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物�?POD)催化，使 4-氨基安替比林与酚(三者合� PAP)反应，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)，当 CEH不存在时，胆固醇酯不能被水解，因而只能检测到游离胆固醇的含量，分光光度计� 500�?20nm处进行比色测定，用于定量测定人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的游离胆固醇含量。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途、�/span>

产品组成９�/strong>

试剂(A): COD-PAP工作涱�/span>	Good's Buffer	2×50ml	-20℃避先�/span>
	胆固醇氧化酶	2×50ml	-20℃避先�/span>
	过氧化物酵�/span>	2×50ml	-20℃避先�/span>
	4-氨基安替比林	2×50ml	-20℃避先�/span>
	稳定剁�/span>	2×50ml	-20℃避先�/span>
试剂(B): FC标准(5mmol/L)		1ml	-20℃避先�br/>
试剂(C): ddH2O		1ml	RT
使用说明�?/span>		1仼�br/>

自备材料９�/strong>

1、生理盐水或 PBS

2、离心管、小试管� 96孔板

3、水浴锅或恒温箱

4、分光光度计或酶标仪

5、全自动或半自动生化分析�?/span>

操作步骤(仅供参�?９�/strong>

1、样本处理：

①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分离出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测、�/span>

②细胞样本：

a.取适量的细�?一般推�?gt;106以上)�?000g离心 10min，弃上清，留取沉淀、�/span>

b.� PBS或生理盐水清� 1�?次，1000g离心 10min，弃上清，留取沉淀、�/span>

c.加入 200�?00μl� PBS或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率 300W，每欠�/span>

3�?s，间� 30s，重� 3�?次，亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心；亦可用 1�?% Triton X-100冰浴 30�?0min，制备好的裂解液不可离心、�/span>

③组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或 PBS(ml)=1�?的比例，加入生理盐水� PBS，冰浴条件下手动或机械匀浆，2500�?000g离心 10min，取上清、�/span>

2� TC测定

酶标仪、全自动生化分析� FC测定
加入�?μl)	空白孓�/span>	标准孓�/span>	待测孓�/span>
ddH2O	3	-	-
FC标准(5mmol/L)	-	3	-
待测样本	-	-	3
COD-PAP工作涱�/span>	300	300	300

分光光度�?1ml比色�?、半自动生化分析� FC测定
加入�?ml)	空白箠�/span>	标准箠�/span>	待测箠�/span>
ddH2O	0.01	-	-
FC标准(5mmol/L)	-	0.01	-
待测样本	-	-	0.01
COD-PAP工作涱�/span>	1	1	1

普通分光光度计(2ml比色�?FC测定
加入�?ml)	空白箠�/span>	标准箠�/span>	待测箠�/span>
ddH2O	0.02	-	-
FC标准(5mmol/L)	-	0.02	-
待测样本	-	-	0.02
COD-PAP工作涱�/span>	2	2	2

①各种仪器按上表依次加入试剂，充分混匀, 37℃水浴中孵育 5min、�/span>

②立即用相应仪器测定 500�?20nm吸光度，以空白孔(�?调零，读取标准孔(�?、测定孔(�?的吸光度，分别记� A_标准、A_测定、�/span>

机器参数９�/strong>

主波�?次波镾�br/>	500/600nm
反应类型	终点泔�/span>
反应方向	升反�?+)

计算公式９�/strong>

血清、血浆等液体样本(空白调零)� FC(mmol/L)= A_测定/A_标准×5

血清、血浆等液体样本(全自动生化分析仪)� FC(mmol/L)= (A_测定- A_空白)/(A_标准- A_空白)×5

组织样本(空白调零)９�/span>

FC(mmol/g)= A_测定/A_标准×5×V₂/(m×1000)组织样本(全自动生化分析仪)９�/span>

FC(mmol/g)= (A_测定- A_空白)/(A_标准- A_空白)×5×V/(m×1000)

细胞样本(空白调零)９�/span>

FC(mmol/L)= A_测定/A_标准×5×V₂/V₁

细胞样本(全自动生化分析仪)９�/span>

FC(mmol/L)= (A_测定- A_空白)/(A_标准- A_空白)×5×V₂/V₁

式中：m=组织样本取样�?g)

V₁=细胞样本取样�?ml)

V₂=样本匀浆液总体�?ml)

参考区间：

FC标准(5mmol/L)=442.48mg/dl【�/span>

健康成年人理想范围：<1.7mmol/L(<67mg/dl)

性能指标９�/strong>

外观	无色至淡黄色澄清液体
线性范図�/span>	0.1�?3mmol/L(3.6�?00mg/dl)，R2>0.95
灵敏�?/span>	检测下� 0.1mmol/L(3.6mg/dl)
变异系数	批内<3%，批�?lt;5%
空白吸光倻�/span>	<0.1(1cm光径)
干扰因素	胆红� <410 μ mol/L ；血红蛋� <7g/L ；甘油三�?lt;28.5mmol/L时，对结果无明细影响、�/span>

注意事项９�/strong>

1、上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降、�/span>

2、COD-PAP工作液如不经常使用，应充分溶解后分装-20℃保存，� 4℃短期保存、�/span>

3、本法可直接用于检测脑脊液中的 FC含量，但不能直接检测尿液中� FC含量，因为未经处理的尿液中含有还原性物质，影响过氧化物酶反应、�/span>

4、检� FC的血清或血浆宜� EDTA或肝素抗凝，如不能及时测定，密闭保存�?℃可稳定 1周，-20℃可以稳定半年以上、�/span>

5、本法线性范围可� 13mmol/L，如果样� FC浓度过高，结果可能呈假性降低，应用生理盐水稀释后重测，结果乘以稀释倍数、�/span>

6、该试剂盒既可作终点法检测，又可作速率法检测、�/span>

7、本法不适于检测总胆固醇的浓度，如需检测总胆固醇(TC)含量，请选择相关产品、�/span>

有效期：6个月有效�?℃运输，-20℃保存、�/span>