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茶多酚(TP)检测试剂盒(福林酚微板法)
茶多酚(TP)检测试剂盒(福林酚微板法)图片
包装: 100T
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半岛bd体育手机客户端 介绍

茶多酚(Tea Polyphenols,TP)是茶叶中多酚类物质的总称,包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等,是一类儿茶素为主体的黄酮化合物,儿茶素占 60~80%,具有 C6-C3-C6碳骨架结构,是一种重要的天然抗氧化物质,能够清除自由基。类物质茶多酚又称茶鞣或茶单宁,是形成茶叶色香味的主要成份之一,也是茶叶中有保健功能的主要成份之一,研究表明茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用,能有效地阻止放射性物质侵入骨髓,并可使锶 90和钴 60迅速排出体外。

茶多酚(TP)检测试剂盒(福林酚微板法)参考国家标准 GB/T 8313而来,其检测原理是利用福林酚氧化茶多酚中的酚羟基-OH,使其显蓝色,用分光光度计或酶标仪测定765nm(或 600nm)处吸光度,在一定范围内吸光度与颜色深浅的变化成正比,与标准曲线比较,进而计算出茶多酚的含量,主要用于测定植物组织样品中茶多酚含量,尤其适用于茶叶。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。

半岛bd体育手机客户端 组成:
试剂(A):茶多酚标准(1mg/ml) 1ml 4℃避光
试剂(B):福林酚试剂 1.5ml 4℃避光
试剂(C): TP显色液 10ml 4℃
使用说明书 1份
自备材料:

1、茶叶、绿茶等待测样本、蒸馏水、甲醇

2、研钵、200目细胞筛、水浴锅或电炉

3、离心机、离心管或试管、96孔板、酶标仪水浴锅或电炉

操作步骤(仅供参考):

1、准备样品:

①固体样品:称取 1g植物样品,充分研磨成粉末,称取 0.2g加入 10ml离心管中,再向其中加入在 70℃水浴中预热的 70%甲醇水溶液 5ml,盖紧并使样品湿润,立即放入70℃水浴中浸提 10min(每隔 5min晃动 1次),浸提后冷却至室温,3500r/min离心10min,转移上清液至 10ml容量瓶,向样品残渣再加入 5ml 70%甲醇水溶液浸提一次,重复上述操作;合并上清液并定容至 10ml,摇匀,即为茶多酚提取液;4℃避光保存,用于茶多酚的检测。

②绿茶、血浆、血清和尿液等液体样品:绿茶样品可直接用该试剂盒测定;血浆、血清按照常规方法制备后可直接用本试剂盒测定。

2、配制系列茶多酚标准:用蒸馏水和茶多酚标准(1mg/ml),按下表进行操作,依次稀释。

加入物(μl) 1 2 3 4 5 6 7
茶多酚标准(1mg/ml) 5 10 20 40 60 80 100
蒸馏水 995 990 980 960 940 920 900
相当于茶多酚含量(μg/ml) 5 10 20 40 60 80 100

3、配制福林酚工作液:按照福林酚试剂:蒸馏水=1:9的比例,现配现用,不宜长期保存。

4、 TP加样:取 96孔板,按照下表设置空白孔、对照孔、测定孔,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡;如果样品中的 TP浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测**能设置 2平行孔,求平均值。

加入物(μl) 空白孔 标准孔 测定孔
蒸馏水 25
系列茶多酚标准(1~7号) 25
待测样品 25
福林酚工作液 125 125 125
摇匀,反应 5~8min。加入 100μl TP显色液,摇匀,室温下放置 60min。

5、 TP测定:以空白孔调零,酶标仪测定 765nm(或 600nm)处各标准孔、测定孔的吸光度。

计算:

以系列茶多酚标准浓度(1~7号)(5、10、20、40、60、80、100μg/ml)为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程;以测定管吸光度代入回归方程求得提取液中 TP含量。

固体样品 TP含量(μg/g)= (C×VT×N)/W

式中:C=根据标准曲线求得提取液中茶多酚含量(μg/ml)

VT=提取液的总体积(ml) =10ml

W=固体样品的质量(g) =0.2g

N=提取液的稀释倍数

液体样本 TP含量(μg/ml)= C×N

式中:C=根据标准曲线求得提取液中茶多酚含量(μg/ml)

N=提取液的稀释倍数

注意事项:

1、茶多酚提取液宜 4℃避光保存,且保存时间在 24h以内。

2、福林酚有一定的腐蚀性,请小心操作。

3、样品中茶多酚浓度过高,颜色反应将特别深,超出半岛游戏平台官网入口网址 的检测范围,应用蒸馏水适当稀释重新检测。

4、该试剂盒测定标准品时,肉眼可见,浓度小于 10μg/ml时呈浅蓝色,20~60μg/ml时呈蓝色,大于 80μg/ml时呈深蓝色。

附录: 参考标准曲线范围: Leagene测定茶多酚标准在 5、10、20、40、60、80、100 μg/ml时的吸光度,据此作出其参考标准曲线如下:

注意:由于检测半岛游戏平台官网入口网址 和操作手法等条件的不同,参考值范围会有波动,该值仅供参考。

有效期: 6个月有效;4℃运输,4℃保存。
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