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植物花色苷含量检测试剂盒(可见分光光度法)
植物花色苷含量检测试剂盒(可见分光光度法)图片
包装: 50管/24样
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半岛bd体育手机客户端 介绍

花色苷是一类可食用的易溶于水等溶剂的天然色素。花色苷使植物呈现多彩的颜色,本身更具有多种保健作用,因而在天然食用色素、保健品和医药行业都有着广阔的应用前景。

根据花色苷在不同pH下的结构性质测定花色苷含量,在pH为1时花色苷在530nm处有最大吸收峰,而当pH为4.5时,花色苷转变为无色查尔酮形式在530nm处无吸收峰,通过测定不同pH下的530nm和700nm处的吸光度值计算样本中花色苷的含量。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

半岛bd体育手机客户端 内容:

试剂名称 规格 保存条件
提取液 液体30ml×1瓶 2-8℃
试剂一 液体30ml×1瓶 2-8℃
试剂二 液体30ml×1瓶 2-8℃

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品:

可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

按照样本质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1ml提取液),充分匀浆后转移到EP管中,封口膜封口防止挥发,60℃浸提30min,期间可震荡数次,提取后提取液定容至1ml。12000rpm,常温离心10min,取上清液待测。

二、测定操作表:

1.可见分光光度计预热30min,蒸馏水调零。

2.加样表:

试剂名称(μL) 测定管1 测定管2
样本 100 100
试剂一 900 -
试剂二 - 900
充分混匀后测定测定管1和测定管2分别在530nm和700nm处的吸光度,测定管1在530nm和700nm处的吸光值记为A1、A1’,测定管2在530nm和700nm处的吸光值记为A2、A2’,计算ΔA=(A1-A1’)-(A2-A2’)。

三、花色苷含量计算:

1.按样本质量计算

花色苷含量(μmol/g质量)=[ΔA÷(ε×d)×103×F] ×V提取÷W=0.037×ΔA×F÷W。

2.按样本蛋白浓度计算

花色苷含量(μmol/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×103×F] ×V提取÷(Cpr ×V提取)=0.037×ΔA×F÷Cpr。

F:稀释倍数,该反应体系下为10;d:比色皿光径,1cm;W:样本质量,g;ε:花色苷的摩尔消光系数,2.69×104ml/mmol/cm;V提取:提取液总体积,1ml;103:单位换算系数,1mmol=103μmol;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml(蛋白浓度需用PBS单独提取后自行测定)。

注意事项:

1.如果A1大于1,可以适当加大稀释倍数,保证总体积1ml不变,如50μL上清液和950μL试剂一(相当于稀释20倍);如果A1小于0.1,可以适当缩小稀释倍数,保证总体积不变,如500μL上清液和500μL试剂一(相当于稀释2倍),使A1保持在0.1~1范围内,可提高检测灵敏度;注意应同样调整上清液和试剂二体积比例;计算时以实际稀释倍数代入下述公式中。

2.因提取液会使蛋白变性,若使用蛋白浓度计算需用 PBS单独提取后自行测定。

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