试剂 半岛游戏平台官网入口网址 设备 原料
银牌会员第 5
访问量: 2314192 网址:hydranal.cnreagent.com 在线留言
半岛bd体育手机客户端 搜索
检测试剂盒 >> 生化试剂盒
琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒(微量法)
琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒(微量法)图片
包装: 100管/96样
索取资料及报价
半岛bd体育手机客户端 介绍

SDH(EC 1.3.5.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶,位于线粒体内膜上的一种膜结合酶,是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外,为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。

SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸(PMS)传递还原2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),并且在600nm处具有特征吸收峰,通过600nm吸光度的变化,测定2,6-DCPIP的还原速度,代表SDH酶活性。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

半岛bd体育手机客户端 内容:

试剂名称 规格 保存条件
试剂一 液体110ml×1瓶 -20℃
试剂二 液体1ml×1支 -20℃
试剂三 液体18ml×1瓶 2-8℃
试剂四 粉剂×1支 2-8℃
试剂五 粉剂×1瓶 2-8℃
试剂六 粉剂×1瓶 -20℃

溶液的配制:

1.试剂四:临用前加入到试剂三中溶解待用;

2.试剂五:临用前加入4ml双蒸水,用不完的试剂仍4℃保存;

3.试剂六:临用前加入3.333ml双蒸水,用不完的试剂4℃保存。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

准确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1ml试剂一和10μL试剂二,用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨,4℃ 11000g离心10min,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至600nm,蒸馏水调零。样本测定。

试剂名称(μL) 测定管 空白管
试剂三 168 168
试剂五 12 12
37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)保温10min左右

样本 10
蒸馏水
10
试剂六 10 10

在加入试剂六的同时开始计时,在600nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和1分20秒时的吸光度A2,计算ΔA=A1-A2,得到ΔA测定、ΔA空白。

三、SDH活性的计算

a.用微量比色皿测定的计算公式如下

(1)按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

SDH活性(U/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(Cpr×V样)÷T=952.381×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr

(2)按样本质量计算

单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

SDH活性(U/g质量)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×W)÷T=961.905×(ΔA测定-ΔA空白)÷W

(3)按细菌或细胞数量计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

SDH活性(U/104cell)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×500)÷T=1.924×(ΔA测定-ΔA空白)

V反总:反应体系总体积,2×10-4L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×104L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.01ml;V样总:加入试剂一和试剂二体积,1.01ml;T:反应时间,1min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万;109:单位换算系数,1mol=109nmol。

b.96孔板测定的计算公式如下

(1)按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

SDH活性(U/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(Cpr×V样)÷T=1587.302×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr

(2)按样本质量计算

单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

SDH活性(U/g质量)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×W)÷T=1603.175×(ΔA测定-ΔA空白)÷W

(3)按细菌或细胞数量计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

SDH活性(U/104cell)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×500)÷T=3.206×(ΔA测定-ΔA空白)

V反总:反应体系总体积,2×10-4L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×104L/mol/cm;d:96孔板光径,0.6cm;V样:加入样本体积,0.01ml;V样总:加入试剂一和试剂二体积,1.01ml;T:反应时间,1min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万;109:单位换算系数,1mol=109nmol。

注意事项:

1.测定过程中所有试剂和样本在冰上放置,以免变性失活。

2.若ΔA大于0.5(比色皿)/0.3(96孔板),需将酶液用酶提取液稀释,使ΔA小于0.5/0.3,可提高检测灵敏度。

3.由于提取液中含有一定浓度的蛋白(约1mg/ml),所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。

相关半岛bd体育手机客户端
我要咨询 关闭
  • 姓名*
  • 电话*
  • 单位*
  • email
  • 留言内容*
  • 验证码*
  • 让更多商家关注
  • Baidu
    map