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还原糖检测试剂盒(斐林比色法)
还原糖检测试剂盒(斐林比色法)图片
包装: 50T/100T
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半岛bd体育手机客户端 介绍

斐林试剂(Fehling's Reagent)又称菲林试剂或裴林试剂,是德国化学家Hermann von Fehling 1849年所发明。斐林试剂与班氏试剂(Benedict's Reagent)相似,均是用来检测还原糖的存在。其原理是与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下,能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。

还原糖检测试剂盒(斐林比色法),主要由酒石酸钠钾、硫酸铜等组成。其测定原理是还原糖具有醛基和酮基,在碱性溶液中煮沸,能把斐林试剂中的Cu还原成Cu,使蓝色的斐林试剂脱色,脱色程度与溶液中还原糖含量成正比,在590nm下可用比色法测定吸光度,查标准曲线即可计算出样品中还原糖的含量。本半岛bd体育手机客户端 主要用于含淀粉食品、酒精饮料、碳酸饮料、肉制品、蜜饯等食品和植物等样品中还原糖的定量检测;总糖的含量也可以测定,但需要提前水解后才能检测,也可用于还原糖的定性试验。本半岛bd体育手机客户端 仅用于科研。

半岛bd体育手机客户端 组成:

半岛bd体育手机客户端 名称 50T 100T 保存条件
试剂(A): Glu标准(1mg/ml) 30ml 50ml 2-8℃
试剂(B): Fehling’s Reagent A 50ml 100ml 室温
试剂(C): Fehling’s Reagent B 50ml 100ml 室温,避光
试剂(D):甲基红指示剂 10ml 20ml 室温
试剂(E): pH中和液(10×) 50ml 100ml 室温

自备材料:

1.试管或离心管

2.锥形瓶、容量瓶、玻璃珠

3.水浴锅或酒精灯

4.果糖、转化糖等还原糖标准(1mg/ml)

5.盐酸水溶液、氢氧化钠溶液

6.10%乙酸铅溶液、饱和硫酸钠溶液

7.蒸馏水、碘液

8.分光光度计、比色皿

操作步骤:

1.配置斐林试剂:Fehling's Reagent A液和B液等比例混合即成,不可久置。

2.配置pH中和液(1×):pH中和液(10×)和水按1:9比例混合即成。

3.样品中还原糖的提取:

a、固体样品(如含淀粉食品、植物样品等):称取粉碎或混匀后的试样10~20g(精确到0.01g),置250ml容量瓶中,当体积接近150ml时,滴加1~3滴甲基红指示剂,如呈红色,可用pH中和液调至微黄色。若用风干样品,可称取3g,直接加入容量瓶,加入少量水湿润后,再加水至150ml左右加入指示剂和中和液。将容量瓶置于80℃的恒温水浴中保温30min,期间摇动数次,以便将还原糖充分提取出来。对于含蛋白质较多的样品,

此时可加入乙酸铅溶液除去蛋白质,至不再产生白色絮状沉淀时,加入饱和的硫酸钠溶液除去多余的铅离子。30min后取出冷却并定容至刻度,摇匀后取滤液备用。

b、酒精饮料:称取混匀后的试样100g(精确到0.1g),置于蒸发皿上,滴加1~3滴甲基红指示剂,用pH中和液调至微黄色,在水浴上蒸发至原体积的1/4后,移入250ml容量瓶中,置于80℃的恒温水浴中保温30min,期间摇动数次。含蛋白质较多的样品参考上述方法。滤液备用。

c、碳酸饮料:称取混匀后的试样100g(精确到0.1g),置于蒸发皿上,在水浴上微微搅拌除去二氧化碳后,移入250容量瓶中,用水洗涤蒸发皿,并入容量瓶,加水至刻度,混匀后备用。

d、总糖的水解和提取:称取植物样品0.5~3g,剪碎,加入蒸馏水约3ml匀浆,转移至三角烧瓶中,用12ml蒸馏水冲洗研磨器2~3次,冲洗液也转移至烧瓶中。向三角烧瓶中加入10ml 6M盐酸溶液,摇匀,煮沸30min,并不时搅拌。取2滴加于小离心管中,再滴加1滴碘液,检查水解是否完全,如已经水解完全,则不显示蓝色。水解完毕后,冷却至室温,滴加6M氢氧化钠溶液,使溶液pH接近中性。含蛋白质较多的样品参考上述方法。滤液或上清液用蒸馏水定容至100ml,混匀。取10ml,用蒸馏水定容至100ml,摇匀备用。

4.制作还原糖标准曲线:按下表设置空白管(0号)、梯度标准管(1~6号),按顺序依次加入。

加入物质(ml) 0 1 2 3 4 5 6
Glu标准(1mg/ ml) 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3
蒸馏水 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0
葡萄糖含量(mg) 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3
斐林试剂 2

将各管混匀后,沸水浴加热15min。冷水或自来水冷却,2500r/min离心5~10min。

取上清,1cm比色皿,空白管调零,用分光光度计测590nm的吸光度值。以各标准管吸光度减去空白管吸光度的差值为纵坐标、对应葡萄糖含量为横坐标,绘制标准曲线。

5.样品还原糖的测定:

吸取准备好的还原糖提取液3ml,加入2ml斐林试剂,混匀。沸水浴加热15min。冷却、离心、取上清、测定等操作同标准曲线。空白管调零后,用样品管的吸光度值带入回归方程即可计算出样品中还原糖的含量。

结果计算:

样品还原糖含量(%)= m×VT ×N/(m0 ×VS ×1000)×100

式中:m=样品中还原糖的含量(mg) VT=提取液总体积(ml)

N=稀释倍数

m0 =样品质量(g) VS=测定时取用的提取液体积(ml)

1000=单位换算系数。

附:还原糖的定性试验

1.配制斐林试剂工作液:临用前,取适量试剂(A)、试剂(B)等量混合即成,即配即用。

2.向洁净试管中加入1~2ml待测样品。

3.向该试管中加入1ml斐林试剂工作液,充分摇匀。

4.将上述混合液置于沸水浴中,并持续1~3min。

5.观察试管内混合液颜色是否发生变化,其颜色变化顺序应为浅蓝色-棕色-砖红色(沉淀)。

鉴定结果:

还原性糖(如核糖、葡萄糖、果糖等)砖红色沉淀非还原性糖(蔗糖、淀粉等)无颜色变化

注意事项:

1.样品提取液中还原糖浓度过高时,应适当稀释后再行测定。

2.样品提取液中还原糖浓度过低时,可提高样品的浓度或增加提取液的用量。

3.可合理减少或增加提取液和斐林试剂的用量。

4.斐林试剂的A、B液须分开储存,临用前按要求混合使用。

5.斐林试剂B液呈强碱性,需小心操作。

6.6M盐酸配制:用市售盐酸和蒸馏水或去离子水等比例混合即成6M盐酸,该过程会放热,应小心操作,避免伤人。

有效期:12个月有效。

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