半岛bd体育手机客户端 介绍
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 果胶(Pectin)是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分,对细胞起着软化和黏合作用。果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联,通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶,如水溶性果胶(WSP)、离子结合型果胶(ISP)和共价结合果胶(CSP)。 利用带有螯合剂的碱溶液提取共价结合型果胶(CSP),其在酸性条件下水解生成半乳糖醛酸,后者在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应形成紫红色的化合物,生成物质在530nm处有最大吸收峰。 半岛bd体育手机客户端 内容: 提取液一:80%乙醇,自备。即将80ml无水乙醇和20ml蒸馏水混合。 提取液二:液体50ml× 1瓶,4℃保存。 提取液三:液体70ml× 1瓶,4℃保存。 试剂一:浓硫酸30ml,自备。 试剂二:液体3ml×1瓶,4℃保存。 试剂三:液体5ml× 1瓶,4℃保存。 标准品:粉剂×1支,10mg半乳糖醛酸,4℃保存。临用前加入0.943ml提取液三,配成50μmol/ml的标准液。 需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品: 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、丙酮、浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水。 操作步骤: 一、共价结合型果胶的提取: 取约0.1g样本,加入1ml提取液一,室温快速匀浆,95℃水浴20min,冷却至室温,4000g 25℃离心10min,弃上清。沉淀加入1.5ml提取液一和丙酮交替各洗2遍(涡旋振荡2min左右,4000g 25℃离心10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入1ml提取液二(去除淀粉)浸泡15小时,4000g 25℃离心10min,弃上清,加入1ml提取液三,充分匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清液待测。 二、测定步骤: 1、分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至530nm,蒸馏水调零。 2、将50μmol/ml标准液用提取液三稀释为0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/ml的标准溶液备用。 3、操作表:
三、共价结合型果胶含量的计算: 1、标准曲线的绘制:以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的△A标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将△A测定带入方程得到x(μmol/ml) 2、共价结合型果胶含量的计算: 共价结合型果胶含量(μmol/g鲜重)= x×V提取液三÷W =x÷W V提取液三:加入提取液三的体积,1ml;W:样本鲜重,g。 注意事项: 1、浓硫酸具有强腐蚀性,操作时需特别注意,90℃加热取出后冷却再打开盖子,以防液体飞溅烧伤。 2、若△A超过0.3,可将样本用提取液三进行适当稀释再进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。 |
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