转氨酶是催化α -氨基酸和α -酮酸之间氨基转换反应的一组酶，天门冬氨酸氨基转移酶(AST)旧称谷草转氨酶 (GOT)主要存在于心肌、骨骼肌、肝脏，以心肌含量最高，肝脏次之，AST能够催化天门冬氨酸和a-酮戊二酸的氨基转移作用，形成谷氨酸和草酰乙酸。

天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏微板法)其检测原理是天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化天门冬氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，在ALT催化下，其反应公式如下：L-天门冬氨酸+α-酮戊二酸→草酰乙酸+L-谷氨酸。

二硝基苯肼与α-酮酸反应生成相应的二硝基苯腙，在碱性条件下二硝基苯腙的吸收光谱有差异，通过分光光度计检测在500～520nm处差异最大，以等摩尔浓度计算出丙酮酸的生成量，进而计算酶的活性。100T该试剂盒可检测50个样品(不含标准品)，该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

半岛bd体育手机客户端 组成：

半岛bd体育手机客户端 名称	100T	保存条件
试剂(A):丙酮酸标准	22mg	室温
试剂(B):丙酮酸标准稀释液	5ml	室温
试剂(C):标准对照液	2ml	2-8℃
试剂(D): AST Assay buffer	3ml	2-8℃，避光
试剂(E):二硝基苯肼显色液	3ml	2-8℃，避光
试剂(F): AST显色基液	25ml	室温

自备材料：

1.蒸馏水

2.离心管

3.水浴锅或恒温箱

4.96孔板、酶标仪

操作步骤 (仅供参考) ：

1.准备样品：

①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃保存1个月有效，用于AST/GOT的检测。

②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个月有效，用于AST/GOT的检测。

③(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的AST/GOT含量。

2.制作AST标准曲线：取丙酮酸标准1支，准确加入丙酮酸标准稀释液1ml，充分混匀，即配制成丙酮酸标准(100mmol/L)，4保存备用。临用前，取适量的丙酮酸标准(100mmol/L)，按丙酮酸标准(100mmol/L)：丙酮酸标准稀释液=1：49的比例混合，即为丙酮酸标准工作液-丙酮酸标准(2mmol/L)，按下表制备标准曲线。**设定平行检测管，求平均值。

加入物(μ l)	0	1	2	3	4
丙酮酸标准(2mmol/L)	0	2	4	6	8
标准对照液	4	4	4	4	4
AST Assay buffer(37℃提前孵育5min)	20	18	16	14	12
相当于AST/GOT(卡门单位)	0	24	61	114	190

混匀，向各管中加入二硝基苯肼显色液20μL，37℃孵育20min后加入AST显色基液200μL，混匀。室温放置5min，以蒸馏水调零，酶标仪测定505nm处各孔的吸光度。各孔的吸光度均减去”0”号孔的吸光度，所得吸光度的差值(纵坐标)与对应的卡门酶活力单位(横坐标)作图。

3.AST酶促反应：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

加入物(μL)	对照孔	测定孔
待测样品(如血清等)	4	4
AST Assay buffer(37℃提前孵育5min)	-	20
混匀，37℃水浴孵育60min。
AST Assay buffer(37℃提前孵育5min)	20	-
二硝基苯肼显色液	20	20
混匀，37℃水浴孵育20min。
AST显色基液	200	200

4.AST测定：混匀，室温放置5min，以蒸馏水调零，酶标仪505nm处测定对照孔、测定孔的吸光度(即为A对照、A测定)。

计算：以标准活力单位(24、61、114、190)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，测定管的吸光度减去对照管的吸光度的差值(即A测定-A对照)，从标准曲线查得AST活力单位。

参考范围：

成年健康人血清AST：8-28卡门单位/ml

注意事项：

1.二硝基苯肼显色液溶解以后，如果仍然有结晶析出，应弃用。

2.由于赖氏法的特点，在绘制标准曲线时每个点**做3孔的重复测定，求出各标准管的吸光度均值，减去“0”号管吸光度均值后，对照赖氏单位绘制标准曲线。

3.血清中AST活性在室温可以保存2天，4℃保存1周，-20℃保存1个月。

4.成批样品测定时，一般无需每份样本都做自身血清对照，以试剂空白管代替即可。

5.对于超过正常范围的血清样品，应该进行复测，复测时每份样本都应做自身血清对照。

6.严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高，因此检测该类样品时应做自身血清标本对照。

7.当样品的酶活力大于190卡门单位时，应将样本进行5～10倍稀释后再行测定。

8.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：

6个月有效。4℃运输，4℃保存。