S-GLS(EC 3.5.1.2)存在于某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。

S-GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用靛酚蓝比色法测定氨增加的速率，即可计算其酶活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

半岛bd体育手机客户端 组成：

试剂名称	规格	保存条件
试剂一	液体30ml×1瓶	4℃
试剂二	粉剂×1瓶	4℃
试剂三A液	液体0.4ml×1支	4℃
试剂三B液	液体1.6ml×1瓶	4℃
试剂四	液体2ml×1瓶	常温
标准品	液体1ml×1支	4℃

溶液的配制：

1.试剂二：临用前加入15ml蒸馏水备用。

2.试剂三：临用前将试剂三A倒入试剂三B中混匀备用(A：B=1：4比例配制)。

3.标准品：10μmol/ml氮标准液。将标准溶液用蒸馏水稀释64倍得0.156μmol/ml的标准溶液。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品：

台式离心机、可见分光光度计/匀浆器、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、30～50目筛、研钵、甲苯、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30～50目筛。

二、测定步骤

1.分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至630nm，分光光度计蒸馏水调零。

2.样本测定(在EP管中加入下列试剂)

试剂名称	测定管	对照管	标准管	空白管
风干土样(g)	0.05	0.05	-	-
甲苯(μL)	25	25	-	-
常温静置10min。
试剂一(μL)	275	275	-	-
试剂二(μL)	200	-
蒸馏水(μL)	-	200		80
混匀，37℃水浴1小时。10000g常温离心10min，取上清液于96孔板或者1.5mlEP管中。
上清液	80	80	-	-
标准液	-	-	80	-
试剂三	16	16	16	16
试剂四	12	12	12	12
蒸馏水	92	92	92	92

混匀，室温放置30min，630nm处读取吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管，计算ΔA=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。

三、酶活性计算

单位定义：37℃下每 g土壤每天催化谷氨酰胺生成 1μmol氨定义为一个酶活力单位。

S-GLS(U/g土样)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V酶促÷W÷T=1.872×ΔA÷ΔA标准÷W

V酶促：酶促反应总体积，0.5ml；T：反应时间，1/24d；W：土壤质量，g；C标准：标准液浓度，0.156μmol/ml。

注意事项：

1.当测定吸光值大于 0.8时，建议将上清液用蒸馏水进一步稀释后测量。

2.离心后若上清液仍含有少量杂质，可将上清液再次 10000g，常温离心 10min去除。

3.试剂三配置后尽快使用，若发现变色则不能再用。

实验实例：

1.取两管 0.05g三叶草土，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，记为 A测定管、A对照管。用 96孔板测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.8-0.175=0.625，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.268-0.044=0.224，计算酶活得：S-GLS(U/g土样)=1.872×ΔA÷ΔA标准÷W=1.872×0.625÷0.224÷0.05=104.46 U/g土样。

2.取两管 0.05g林土样即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，记为 A测定管、A对照管。用 96孔板测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.466-0.164=0.302，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.268-0.044=0.224，计算酶活得：S-GLS(U/g土样)=1.872×ΔA÷ΔA标准÷W=1.872×0.302÷0.224÷0.05=50.477 U/g土样。