试剂 半岛游戏平台官网入口网址 设备 原料
银牌会员第 5
访问量: 2314374 网址:hydranal.cnreagent.com 在线留言
半岛bd体育手机客户端 搜索
检测试剂盒 >> 生化试剂盒
超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒(可见分光光度法)
超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒(可见分光光度法)图片
包装: 50管/24样
索取资料及报价
半岛bd体育手机客户端 介绍

SOD(EC 1.15.1.1)是一种广泛存在于生物体内的金属酶,是重要的氧自由基清除剂,能催化超氧化物阴离子发生岐化作用,生成H2O2和O2。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系统中具有重要作用。通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-),O2-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜,后者在560nm处有吸收;SOD可清除O2-,从而抑制了甲臜的形成;反应液蓝色越深,说明SOD活性愈低,反之活性越高。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

半岛bd体育手机客户端 组成:

试剂名称 规格 保存条件
提取液 液体60ml×2瓶 4℃
试剂一 液体15ml×1瓶 4℃
试剂二 液体160μL×1支 4℃
试剂三 液体11ml×1瓶 4℃
试剂四 粉剂×1支 4℃
试剂五 液体2ml×1瓶 4℃

溶液的配制:

1.试剂二:使用前先离心再吹打混匀。

2.试剂五:临用前将试剂四加入试剂五中,并震荡溶解。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1.细菌或培养细胞样本:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500-1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次),8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2.组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5-10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆;8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3.血清(浆)样本:直接检测。

二、测定步驟

1.分光光度计预热30min以上,调节波长至560nm,蒸馏水调零。

2.测定前将试剂一、三和五37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min以上。

3.样本测定(在EP管中加入下列试剂)

试剂名称(μL) 测定管 对照管 空白管1 空白管2
样本 90 90 - -
试剂一 240 240 240 240
试剂二 6 - 6 -
试剂三 180 180 180 180
蒸馏水 480 486 570 576
试剂五 30 30 30 30

充分混匀,37℃水浴30min后,置于1ml玻璃比色皿测定560nm下的吸光度,分别记为A测定、A对照、A1空白、A2空白,计算ΔA测定=A测定-A对照,ΔA空白=A1空白-A2空白。如底部有沉淀,混匀后再行测定。 (空白管1和空白管2各只需做1~2管,每个样本有一个对照管)

三、SOD活性计算

1.抑制百分率的计算:

抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定)÷ΔA空白× 100%

尽量使样本的抑制百分率在30-70%范围内,越靠近50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小于30%或大于70%,则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高,则需适当稀释样本;如果测定出来的抑制百分率偏低,则需重新准备浓度比较高的待测样本。

2.SOD酶活性单位:在上述黄嘌呤氧化酶偶联反应体系中抑制百分率为50%时,反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位。

3.SOD酶活性计算:

(1)血清(浆)SOD活性(U/ml)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷V样×F=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×F

(2)组织、细菌或培养细胞SOD活力计算:

A按样本蛋白浓度计算SOD活性 (U/mg prot)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷(V样×Cpr)×F=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷Cpr×F

B按样本质量计算SOD活性(U/g质量)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V反总]÷(W×V样÷V样总)×F=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷W×F

C按细菌或细胞数量计算 SOD活力(U/104cell)= [抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷(500×V样÷V样总)×F=0.0228×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×F

V反总:反应体系总体积,1.026ml;V样:加入反应体系中样本的体积,0.09ml;V样总:加入提取液体积,1ml;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万,F:样本稀释倍数。

注意事项:

1.样本和试剂二使用时在冰上放置。

2.样本较多时,可按表格配制工作液(包含试剂一、二、三),试剂五必须最后加入。

3.反应完成后,可能有沉淀生成,混匀后测定即可。

相关半岛bd体育手机客户端
我要咨询 关闭
  • 姓名*
  • 电话*
  • 单位*
  • email
  • 留言内容*
  • 验证码*
  • 让更多商家关注
  • Baidu
    map