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土壤β-葡萄糖苷酶(S-β-GC)活性检测试剂盒(微量法)
土壤β-葡萄糖苷酶(S-β-GC)活性检测试剂盒(微量法)图片
包装: 100管/48样
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半岛bd体育手机客户端 介绍

S-β-GC能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。

S-β-GC能够催化对-硝基苯-β-D吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,产物略显黄色,在400nm有特征光吸收。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

半岛bd体育手机客户端 组成:

试剂名称 规格 保存条件
试剂一 液体5ml×1瓶(自备) 4℃
试剂二 粉剂×1瓶 -20℃
试剂三 液体30ml×1瓶 4℃
试剂四 液体20ml×1瓶 4℃
标准液 液体1ml×1支 4℃

溶液的配制:

1.试剂一:自备甲苯;

2.试剂二:临用前每瓶加入13ml蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;

3.标准液:5mmol/L的对硝基苯酚溶液;

4.标准液的准备:取100μL标准液,加入到400μL试剂三中,得到1mmol/L标准液,再用蒸馏水十倍稀释到100μmol/L。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温培养箱、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、30-50目筛、冰、研钵、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

操作步骤:

一、样品处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。

二、测定步骤

1.分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。

2.用蒸馏水倍比稀释:50、25、12.5、6.25μmol/L。100、50、25、12.5、6.25μmol/L做标准液。

3.加样表:

试剂名称 测定管 对照管 标准管 空白管
风干土样(g) 0.02 0.02 - -
试剂一(μL) 10 10 - -
振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置15min
试剂二(μL) 130 - - -
试剂三(μL) 160 160 - -
混匀,37℃水浴1h后,立即沸水浴煮沸5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却
试剂二(μL) - 130 - -
充分混匀,10000g常温离心10min,取上清液
上清液(μL) 70 70 -
标准液(μL) - - 70
蒸馏水(μL) - - - 70
试剂四(μL) 130 130 130 130

充分混匀,室温静置2min后,测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。(每个测定管设一个对照管)。

三、S-β-GC酶活的计算

1.标准曲线建立:

根据标准管的浓度(y)和吸光度ΔA=A标准管-A空白管(x),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA(x)带入公式计算样本浓度(μmol/L)。

2.S-β-GC酶活的计算:

单位的定义:每天每g土样中产生1μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-β-GC酶活(U/g土样)=y×V反总÷W÷T=0.36×y

T:反应时间,1h=1/24d;V反总:反应体系总体积:3×10-4L;W:样本质量,0.02g。

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