试剂 半岛游戏平台官网入口网址 设备 原料
银牌会员第 5
访问量: 2360831 网址:hydranal.cnreagent.com 在线留言
半岛bd体育手机客户端 搜索
检测试剂盒 >> 生化试剂盒
β-半乳糖苷酶(β-GAL)活性检测试剂盒(可见分光光度法)
β-半乳糖苷酶(β-GAL)活性检测试剂盒(可见分光光度法)图片
包装: 50管/24样
索取资料及报价
半岛bd体育手机客户端 介绍

半岛bd体育手机客户端 内容:

试剂名称 规格 保存条件
提取液 液体50ml×1瓶 4℃
试剂一 粉剂×1瓶 -20℃
试剂二 液体15ml×1瓶 4℃
试剂三 液体80ml×1瓶 4℃
标准品 液体1ml×1支 4℃

溶液的配制:

1.试剂一:临用前每瓶加入5ml双蒸水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存。

2.标准品:5μmol/ml的对硝基苯酚溶液。

半岛bd体育手机客户端 说明:

β-GAL(EC 3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,能够催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷键水解,此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量,还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解,释放自由的半乳糖。

β-GAL分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1.细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2.组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤:

1.分光光度计预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。

2.标准液的处理:用蒸馏水将标准液稀释至200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/ml。

3.样本测定(在EP管中依次加入下列试剂):

试剂名称(μL) 测定管 对照管 标准管
试剂一 200

蒸馏水
200
试剂二 250 250
样本 50 50
迅速混匀,放入 37℃准确水浴30min
标准液

500
试剂三 1000 1000 1000
充分混匀,400nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。

三、β-GAL活性计算:

1.标准曲线的建立:根据标准管的吸光度(x,减去浓度为0的标准管OD值)和浓度(y,nmol/ml)建立标准曲线,将△A带入

标准曲线中,计算样品生成的产物量(nmol/ml)。

2.β-GAL活性计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

β-GAL活力(nmol/h/mg prot)=(y×V反总)÷(V样×Cpr)÷T=20×y÷Cpr

蛋白浓度需要另外测定。

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

β-GAL活力(nmol/h/g鲜重)=(y×V反总)÷(W×V样÷V样总)÷T=20×y÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

β-GAL活力(nmol/h/104cell)= (y×V反总)÷(500×V样÷V样总)÷T=0.04×y

Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;V反总:反应体系总体积,0.5ml;V样:加入反应体系中样本体积,0.05ml;V样总:加入提取液体积,1ml;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万;T:反应时间,0.5h。

相关半岛bd体育手机客户端
我要咨询 关闭
  • 姓名*
  • 电话*
  • 单位*
  • email
  • 留言内容*
  • 验证码*
  • 让更多商家关注
  • Baidu
    map