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土壤β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖甘酶(S-C1)活性检测试剂盒(微量法)
土壤β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖甘酶(S-C1)活性检测试剂盒(微量法)图片
包装: 100管/48样
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半岛bd体育手机客户端 介绍

β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖苷酶(C1,EC3.2.1.91)存在于细菌、真菌和动物体内,是纤维素酶系的组份之一,C1酶作用于纤维素线状分子的末端,水解β-葡萄糖苷键,每次切下1个纤维二糖分子。

S-C1能够催化对硝基苯纤维二糖苷(PNPC)生成对-硝基苯酚,后者在400nm有特征光吸收。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

半岛bd体育手机客户端 组成:

试剂名称 规格 保存条件
试剂一 液体2ml×1瓶(自备) 4℃
试剂二 粉剂×2瓶 4℃
试剂三 液体40ml×1瓶 4℃
试剂四 液体30ml×1瓶 4℃
标准品 液体1ml×1支 4℃

溶液的配制:

1.试剂一:甲苯自备。

2.试剂二:临用前每瓶加入7.5ml试剂三,充分溶解备用,用不完的试剂仍4℃保存。

3.标准品:5mmol/L的对硝基苯酚溶液。临用前用试剂三将标准品稀释50倍得100μmol/L的标准溶液。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰、30-50目筛、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30-50目筛。

二、测定步骤

1.分光光度计/酶标仪预热30min以上,波长调至400nm,蒸馏水调零。

2.加样表:

试剂名称 测定管 对照管 标准管 空白管
风干土样(g) 0.03 0.03 - -
试剂一(μL) 15 15 - -
振荡混匀,使土样润湿,室温放置 15min
试剂二(μL) 120 - - -
试剂三(μL) 150 150 - -
混匀,37℃水浴反应 1h后,立即沸水浴 5min(盖紧,防止水分散失),流水/冰浴冷却。
试剂二(μL) - 120 - -
10000rpm 25℃离心 10min,取上清液
上清液(μL) 100 100 - -
标准品(μL) - - 100 -
蒸馏水(μL) - -
100
试剂四(μL) 200 200 200 200

充分混匀,室温静置 2min后,吸取 200μL于微量比色皿/96孔板中测定 400nm处的吸光值 A,分别记为 A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA=A测定管-A对照管,ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管设一个对照管。

三、S-C1 活力计算

单位的定义:每天每 g土样中产生 1μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-C1活力(U/g土样)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V反总÷W÷T =0.684×ΔA÷ΔA标准÷W

T:反应时间,1h=1/24d;V反总:反应体系总体积:2.85×10-4L;C标准:标准溶液浓度,100μmol/L;W:样本质量,g。

注意事项:

当吸光值大于 1.5时,建议将上清液用试剂三稀释后测定或者减少土样质量测定。

实验实例:

1.取两管 0.03g土样,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,记为 A测定管、A对照管。用 96孔板测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.444-0.244=0.2,ΔA标准=A标准管-A空白管=0.413-0.048=0.365,计算酶活得:S-C1活力(U/g土样)=0.684× ΔA测定÷ΔA标准÷W=0.684×0.2÷0.365÷0.03=12.493 U/g土样。

2.取两管 0.03g林土样,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,记为 A测定管、A对照管。用 96孔板测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.33-0.195=0.135,ΔA标准=A标准管-A空白管=0.413-0.048=0.365,计算酶活得:S-C1活力(U/g土样)=0.684×ΔA测定÷ΔA标准÷W=0.684×0.1135÷0.365÷0.03=8.4329 U/g土样。

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