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土壤α-葡萄糖苷酶(S-α-GC)检测试剂盒(微量法)
土壤α-葡萄糖苷酶(S-α-GC)检测试剂盒(微量法)图片
包装: 100管/48样
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半岛bd体育手机客户端 介绍

S-α-GC能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。

S-α-GC能够催化对-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有特征光吸收。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

半岛bd体育手机客户端 组成:

试剂名称 规格 保存条件
试剂一 液体0.5ml×1支(自备) 4℃
试剂二 粉剂×2瓶 -20℃
试剂三 液体15ml×1瓶 4℃
试剂四 液体30ml×1瓶 4℃
标准品 液体1ml×1支 4℃

溶液的配制:

1.试剂一:自备甲苯,4℃保存;

2.试剂二:临用前每瓶加入5ml蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;

3.标准品:5mmol/L的对硝基苯酚溶液。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、30-50目筛、研钵、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30-50目筛。

二、测定步骤

1.分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2.标准品:临用前用试剂三将标准品稀释50倍得100μmol/L的标准溶液。

3.加样表:

试剂名称 测定管 对照管 标准管 空白管
风干土样(g) 0.02 0.02 - -
试剂一(μL) 5 5 - -
振荡混匀,使土样润湿,室温放置15min
试剂二(μL) 80 - - -
试剂三(μL) 100 100 - -
混匀, 37℃水浴1h后,立即沸水浴5min(盖紧,防止水分散失),流水/冰浴冷却。
试剂二(μL) - 80 - -
10000rpm 25℃离心10min,取上清液
上清液(μL) 100 100 - -
标准品(μL) - - 100 -
蒸馏水(μL) - -
100
试剂四(μL) 200 200 200 200

充分混匀,室温静置2min后,测定吸光值A,分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA=A测定管-A对照管,ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管设一个对照管。

三、S-α-GC活力计算

单位的定义:每天每g土样中产生1μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-α-GC活力(U/g土样)=ΔA÷ (ΔA标准÷C标准)×V反总÷W÷T=0.444×ΔA÷ΔA标准÷W。

T:反应时间,1h=1/24d;V反总:反应体系总体积:1.85×10-4L;C标准:标准溶液浓度,100μmol/L;W:样本质量,g。

注意事项:

若ΔA<0.01,可延长 37℃水浴时间;若ΔA>1.5,可将上清液稀释后进行测定;最后计算时注意各个因素的改变。

实验实例:

1.取两管 0.02g三叶草土,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,用 96孔板测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.421-0.238=0.183,ΔA标准=A标准管-A空白管=0.473-0.047=0.426,计算酶活得:

S-α-GC活力(U/g土样)=0.444×ΔA÷ΔA标准÷W=0.444× 0.183÷ 0.426÷0.02=9.5366 U/g土样。

2.取两管 0.02g林土样,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,用 96孔板测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.374-0.225=0.149,ΔA标准=A标准管-A空白管=0.473-0.047=0.426,计算酶活得:S-α-GC活力(U/g土样)=0.444×ΔA÷ΔA标准÷W=0.444× 0.149÷ 0.426÷0.02=7.7648 U/g土样。

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