注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

植酸酶(pHytase)是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸(盐)的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶，它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸收和利用，因此具有极其广泛的研究和应用价值。

测定原理

植酸酶在一定温度和 pH值条件下，水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物，无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物，在 700nm处有特征吸收峰，根据 700nm处吸光值变化可计算得植酸酶活性。

自备实验用品及半岛游戏平台官网入口网址

天平、低温离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、恒温水浴锅，甲苯(不允许快递)。

试剂组成和配制

缓冲液：液体 60ml×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保存，临用前加缓冲液 30ml配制，现用现配；用不完的试剂4℃保存一个月。

试剂二：液体 30ml×1瓶，4℃保存。

显色剂：粉剂×6瓶，4℃避光保存，临用前根据用量每瓶加 1ml双蒸水溶解，再加 4ml试剂二混匀。

样本处理

新鲜土样自然风干或 37度烘箱风干，过 30～50目筛。

测定操作表

	对照管	测定管
样本(g)	0.06	0.06
甲苯	40	40
振荡混匀，室温放置 15min
缓冲液(μL)	1000
试剂一(μL)		1000
混匀，37℃孵育 24h，10000g，4℃离心 5min，取上清
上清	500	500
显色剂(μL)	500	500
混匀，静置 15min，测定 700nm处吸光值，△A=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

酶活性计算公式

标准曲线：y = 1.759x + 0.0084，R²= 0.9977；x为标准品浓度(μmol/ml)，y为吸光值△A。

酶活性定义：在 37℃，pH5.5的条件下，每克土样每小时从 5mmol/L的植酸钠溶液中释放出 1μmol的无机磷为一个酶活力单位。

植酸酶活性(μmol/d/g土样)=(△A-0.0084)÷1.759×V反总÷W÷T=9.84×(△A-0.0084)

V反总：反应总体积，1.04ml；T：反应时间，1d；W：样本质量，0.06g。

注意事项

1、显色剂需要临用前根据用量配制，每一瓶是 5个样本的用量，新配制的显色剂若有颜色则已经污染或者试剂过期，应放弃使用。

2、ΔA线性范围为 0.01-1。