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蔗糖酶测试盒(微量法)
蔗糖酶测试盒(微量法)图片
货号: ZTM-1-Y
包装: 100管/48样
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货号: ZTM-1-Y
半岛bd体育手机客户端 介绍

正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

蔗糖酶(EC 3.2.1.26)是碳水化合物消化吸收的关键酶之一,能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收。

测定原理:

本试剂盒采用 3.5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量,由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是 3.5-二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。

所需的半岛游戏平台官网入口网址 和用品:

可见分光光度计/酶标仪、沸水浴、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 100ml×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体 2ml×1瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1支 ,4℃保存,用时加入 1ml蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃保存;

试剂三:液体 3ml×1瓶,常温保存;

样品测定的准备:

按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10的比例(建议称取约 0.1g组织,加入 1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热 30min以上,调节波长至 520nm,蒸馏水调零。

2、样本测定,(在 EP管中依次加入下列试剂):

试剂名称(μL) 对照管 测定管
试剂一 15 15
蒸馏水 15
样本 30 30
试剂二
15

置于 25℃准确水浴 10min

试剂三
30 30

混匀, 95℃水浴 5min左右(盖紧,防止水分散失),冷却至室温

蒸馏水
210 210

混匀,取 200μL至微量石英比色皿或 96孔板中测定各管 520nm吸光值,ΔA=A测定-A对照,每个测定管需设一个对照管。

蔗糖酶活力计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.1296x -0.12;x为标准品浓度(mg/ml),y为吸光值。

2、按照蛋白浓度计算

单位定义:每 mg组织蛋白每分钟催化水解 1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。

蔗糖酶活力(μg/min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(V1×Cpr)÷T=771×(ΔA+0.12)÷Cpr。

3、按样本鲜重计算

单位定义:每 g组织每分钟催化水解 1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。

蔗糖酶活力(μg/min/g鲜重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=771×(ΔA +0.12)÷W。

1000:1mg/ml=1000μg/ml;V1:加入反应体系中样本体积,0.03ml;V2:加入提取液体积,1ml;T:反应时间,10min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本鲜重,g。

b.用 96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0648x -0.12;x为标准品浓度(mg/ml),y为吸光值。

2、按照蛋白浓度计算

单位定义:每 mg组织蛋白每分钟催化水解 1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。

蔗糖酶活力 (μg/min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.0648×V1]÷(V1×Cpr)÷T=1542×(ΔA+0.12)÷Cpr。

3、按样本鲜重计算

单位的定义:每 g组织每分钟催化水解 1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。

蔗糖酶活力(μg/min/g鲜重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.0648×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=1543×(ΔA +0.12)÷W。

1000:1mg/ml=1000μg/ml;V1:加入反应体系中样本体积,0.03ml;V2:加入提取液体积,1ml;T:反应时间,10min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本鲜重,g。

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