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蔗糖合成酶(合成方向SS-Ⅱ)测试盒(可见分光光度法)
蔗糖合成酶(合成方向SS-Ⅱ)测试盒(可见分光光度法)图片
货号: SSⅡ-2-Y
包装: 50管/24样
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货号: SSⅡ-2-Y
半岛bd体育手机客户端 介绍

正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

蔗糖是源(叶片等)光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13)是双向反应酶,既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其合成方向 SS-Ⅱ的活性对于植物蔗糖合成具有重要意义。

测定原理

SS-Ⅱ催化游离果糖与葡萄糖供体 UDPG反应生成蔗糖,蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在 480nm下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水

试剂组成和配制

提取液:液体 60ml×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体 4ml×1瓶,-20℃保存;

试剂二:1000μg/ml蔗糖溶液 10ml×1瓶,4℃保存;

试剂三:液体 3ml×1瓶,4℃保存

试剂四:液体 40ml×1瓶,4℃保存;

试剂五:液体 10ml×1瓶,4℃保存;

样品测定的准备:

按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10的比例(建议称取约 0.1g组织,加入 1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

试剂名称(μL) 测定管 对照管 标准管 空白管
样本 30 30

蒸馏水
150 150 180
试剂二

30
试剂一 150


混匀,25℃准确水浴 10min

试剂三

50 50 50 50

沸水浴中煮沸 10min左右(盖紧,以防止水分散失),冷却

试剂四 700 700 700 700
试剂五 200 200 200 200

混匀,沸水浴 30min,冷却后, 480nm下测定各管吸光值。标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。

SS-Ⅱ活性计算

1、按照蛋白浓度计算

单位定义:每 mg组织蛋白每分钟催化产生 1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅱ活性(μg/min/mg prot)= C标准管×V1×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr

2、按照样本鲜重计算

单位定义:每 g组织每分钟催化产生 1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅱ活性(μg/min/g鲜重) = C标准管×V1×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W

C标准管:标准管浓度,1000μg/ml;V1:加入反应体系中样本体积,0.03ml; V2:加入提取液体积,1ml;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本鲜重,g;T :反应时间:10min。

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