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蔗糖合成酶(分解方向SS-Ⅰ)测试盒(可见分光光度法)
蔗糖合成酶(分解方向SS-Ⅰ)测试盒(可见分光光度法)图片
货号: SSⅠ-2-Y
包装: 50管/24样
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货号: SSⅠ-2-Y
半岛bd体育手机客户端 介绍

正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

蔗糖是源(叶片等)光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13)是双向反应酶,既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其分解方向 SS-Ⅰ的活性对于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意义。

测定原理

SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游离果糖和UDPG,采用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的含量来反映酶活性的高低。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品

可见分光光度计、水浴锅、离心机、移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰

试剂组成和配制

提取液:液体 60ml×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体 10ml×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体 5ml×1瓶,4℃保存;

试剂三:粉剂×2支,-20℃保存;临用前每支加入 1.2ml试剂二充分溶解待用,现配现用;

试剂四:液体 6ml×1瓶,4℃保存。

样品测定的准备:

按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10的比例(建议称取约 0.1g组织,加入 1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热 30min以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。

2、样本测定,(在 EP管中依次加入下列试剂):

试剂名称(μL) 测定管 对照管
样本 20 20
试剂三 80
试剂一
80

混匀,30℃准确水浴 30min后,95℃水浴 10min,冷却至室温

试剂四
100 100

95℃水浴 5min左右,冷却至室温

蒸馏水
800 800

混匀,540nm下测定各管吸光值。ΔA=A测定-A对照。每个测定管需要设一个对照管。

SS-Ⅰ活性计算

1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0012x - 0.0492;x为标准品浓度(μg/ml),y为ΔA。

2、按照蛋白浓度计算

单位定义:每 mg组织蛋白每分钟催化产生 1μg还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg/min/mg prot)=[ (ΔA+0.0492)÷0.0012×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=138.9×(ΔA+0.0492)÷Cpr

3、按照样本鲜重计算

单位定义:每 g组织每分钟催化产生 1μg还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg/min/g鲜重) =[(ΔA+0.0492)÷0.0012×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=138.9×(ΔA+0.0492)÷W

V反总:反应体系总体积,0.1ml; V样:加入样本体积,0.02 ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g。

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