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蔗糖合成酶(分解方向SS-Ⅰ)测试盒(微量法)
蔗糖合成酶(分解方向SS-Ⅰ)测试盒(微量法)图片
货号: SSⅠ-1-Y
包装: 100管/48样
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货号: SSⅠ-1-Y
半岛bd体育手机客户端 介绍

正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

蔗糖是源(叶片等)光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13)是双向反应酶,既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其分解方向 SS-Ⅰ的活性对于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意义。

测定原理

SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游离果糖和UDPG,采用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的含量来反映酶活性的高低。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰

试剂的组成和配制

提取液:液体 100ml×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体 10ml×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体 5ml×1瓶,4℃保存;

试剂三:粉剂×2支,-20℃保存;临用前每支加入 1.2ml试剂二充分溶解待用,现配现用;

试剂四:液体 6ml×1瓶,4℃保存。

样品测定的准备:

按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10的比例(建议称取约 0.1g组织,加入 1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热 30min以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。

2、样本测定,(在 EP管中依次加入下列试剂):

试剂名称(μL) 测定管 对照管
样本 10 10
试剂三 40
试剂一
40

混匀,30℃准确水浴 30min后,95℃水浴 10min

试剂四
50 50

95℃水浴 5min左右,冷却至室温

蒸馏水
400 400

混匀,取 200μL至微量石英比色皿或 96孔板中,540nm下测定各管吸光值。ΔA=A测定-A对照。每个测定管需要设一个对照管。

SS-Ⅰ活性计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0012x - 0.0492;x为标准品浓度(μg/ml),y为ΔA。

2、按照蛋白浓度计算

单位定义:每 mg组织蛋白每分钟催化产生 1μg还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg/min/mg prot)= (ΔA+0.0492)÷0.0012×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=138.9×(ΔA+0.0492)÷Cpr

3、按照样本鲜重计算

单位定义:每 g组织每分钟催化产生 1μg还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg/min/g鲜重) =(ΔA+0.0492)÷0.0012×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=138.9×(ΔA+0.0492)÷W

V反总:反应体系总体积,0.05ml; V样:加入样本体积,0.01 ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g。

b.用 96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0006x - 0.0492;x为标准品浓度(μg/ml),y为ΔA。

2、按照蛋白浓度计算

单位定义:每 mg组织蛋白每分钟催化产生 1μg还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg/min/mg prot)= (ΔA+0.0492)÷0.0006×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=277.8×(ΔA+0.0492)÷Cpr

3、按照样本鲜重计算

单位定义:每 g组织每分钟催化产生 1μg还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg/min/g鲜重) =(ΔA+0.0492)÷0.0006×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=277.8×(ΔA+0.0492)÷W

V反总:反应体系总体积,0.05ml; V样:加入样本体积,0.01 ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g。

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