注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

硝态氮是指硝酸盐中所含有的氮元素，土壤中的有机物分解生成铵盐，被氧化后变为硝态氮。土壤中硝态氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接关系到作物的产量与品质。

测定原理

在浓酸条件下，NO₃^-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下(pH>12)呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可比色测定计算得硝态氮含量。

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蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、振荡仪。

试剂组成和配制

试剂一：粉剂×2支，4℃避光保存。临用前根据用量每支加 1ml浓硫酸充分溶解。

试剂二：液体 50ml×1瓶，4℃保存。

样本处理

按照土壤质量(g)：蒸馏水体积(ml)为 1：5～10的比例(建议称取约 0.1g新鲜土样，加入1ml蒸馏水)加入蒸馏水，置于振荡仪中振荡提取 1h，25℃，10000g离心 10min，取上清待测。

测定操作表

1、分光光度计或酶标仪预热 30min以上，调节波长至 410nm，蒸馏水调零。

2、操作表(于 EP管中加入下列试剂)

	空白管	测定管
样本(μL)		10
蒸馏水(μL)	10
试剂一(μL)	20	20
充分混匀，25℃静置 30min
试剂二(μL)	475	475
混匀，涡旋振荡，使出现的沉淀充分溶解，转移 200uL至微量石英比色皿/96孔板中测定 410nm处吸光值 A，△A=A测定管-A空白管

计算公式

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0156x+0.0073，R₂=0.9997

NO₃^--N含量(mg/kg鲜重)=(△A-0.0073)÷ 0.0156÷(W÷V样总)=64.1×(△A-0.0073)÷W

V样总：加入提取液体积，1ml，W：样本质量，g

b.用 96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0078x+0.0073，R₂=0.9997

NO₃^--N(mg/kg鲜重)=(△A-0.0073)÷ 0.0078÷(W÷V样总)=128.2×(△A-0.0073)÷W

V样总：加入提取液体积，1ml，W：样本质量，g

注意事项

1.硝酸根不为土壤胶体吸附，且易溶于水，很容易在土壤内部移动，所以测定此指标时应注意采样深度一致。

2.土壤经风干或者烘干很容易引起 NO₃^--N的变化，所以**采用新鲜土壤进行测定，以准确反映该指标含量。

3.试剂一配制好后尽快使用，4℃可保存一周。

4.试剂一和试剂二均具有强腐蚀性，操作时需做好防护措施。

5.最低检出限为 100μg/kg。