试剂 半岛游戏平台官网入口网址 设备 原料
银牌会员第 5
访问量: 2317676 网址:hydranal.cnreagent.com 在线留言
半岛bd体育手机客户端 搜索
检测试剂盒 >> 生化试剂盒
维生素B6测试盒(可见分光光度法)
维生素B6测试盒(可见分光光度法)图片
货号: VB6-2-G
包装: 50管/48样
索取资料及报价
货号: VB6-2-G
半岛bd体育手机客户端 介绍

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

维生素 B6(Vitamin B6)又称吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在体内以磷酸酯的形式存在,是一种水溶性维生素,在细胞中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢,对生物体具有极其重要的作用。

测定原理

VB6与 4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物,在 390nm有特征吸收峰。

自备实验用品及半岛游戏平台官网入口网址

天平、研钵、离心机、可见分光光度计、恒温水浴锅、1 mL玻璃比色皿、蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液:液体 35mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体 1mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体 12mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体 18mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体 18mL×1瓶,4℃避光保存。

样本处理

1.组织:将样品磨碎,按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入 0.6mL提取液)加入提取液,60℃浸提 30min,加蒸馏水 0.4mL,混匀后于25℃,16000rpm离心 10min,取上清测定(动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟)。

2.细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1的比例(建议 500万细胞加入 0.6mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3秒,间隔 7秒,总时间 3min);加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃,16000rpm离心10min,取上清测定。

3.血清:直接测定。

测定操作


空白管 测定管
样品(μL)
200
试剂一(μL) 200
试剂二(μL) 200 200
试剂三(μL) 300 300
试剂四(μL) 300 300
充分混匀,25℃反应 20min,于 1mL玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定 390nm处吸光值,记为 A空白管和 A测定管,△A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。

计算公式

标准曲线:y = 0.3635x+0.0205,R2= 0.9986

1.按照蛋白含量计算

VB6含量(μg/mg prot)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反总÷(V样×Cpr)= 13.76×(△A - 0.0205)÷ Cpr

2.按照样本质量计算

VB6含量(μg/g)=(△A - 0.0205)÷ 0.36359 ×V反总÷(V样×W÷V样总)= 13.76×(△A - 0.0205)÷ W

3.按照细胞数量计算

VB6含量(μg/104cell)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)= 13.76×(△A - 0.0205)÷细胞数量

4.按照液体体积计算

VB6含量(μg/mL)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反总÷V样=13.76×(△A - 0.0205)

V反总:反应总体积,1mL;:V样:加入样本体积,0.2mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g

注意事项

1.若测定结果中吸光值超过 1,请将样本稀释后进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。

2.蛋白浓度较高的样品,比如动物组织,若显色完成后有沉淀产生,将样本稀释后再测定,在计算公式中乘以稀释倍数。

3.显色完成后立即进行测定。

相关半岛bd体育手机客户端
我要咨询 关闭
  • 姓名*
  • 电话*
  • 单位*
  • email
  • 留言内容*
  • 验证码*
  • 让更多商家关注
  • Baidu
    map