注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

铁元素是一种十分重要的植物营养元素，土壤中铁含量直接影响着植物吸收利用以及生长代谢。

测定原理

在 pH2-9范围内，盐酸羟胺将三价铁转化为二价铁，与邻菲罗琳反应生成橙红色配合物，在 510nm有特征吸收峰。

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天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。

试剂组成和配制

提取剂:粉剂×1瓶，4℃保存。

提取液:液体 100mL×4瓶，4℃保存。

试剂一:液体 2mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二:液体 6mL×1瓶，4℃保存。

试剂三:液体 4mL×1瓶，4℃避光保存。

样本处理

新鲜土样风干，过 100目筛，按照土壤质量(g):提取剂质量(g)为 1:4的比例(建议称取约 0.1g土样，加入 0.4g提取剂)缓慢加入提取剂于坩埚中，边加边搅拌均匀，然后在马弗炉中 550℃熔融 10min，然后在 920℃熔融 30min，趁热取出坩埚，将熔融物转入烧杯，边搅拌边加 4mL提取液，必要时加盖，从烧杯口加入，防止溶液溅出，溶解 30min后，5000g，25℃离心 10min，取上清液待测。

测定操作表

	空白管	测定管
样本(μL)		20
试剂一(μL)	20	20
试剂二(μL)	60	60
试剂三(μL)	40	40
H2O(μL)	80	60
充分混匀，25℃静置 20min
于微量石英比色皿/96孔板，蒸馏水调零，测定 510nm处吸光值 A，分别记为 A空白管和 A测定管，△A=A测定管-A空白管

计算公式

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.1569x -0.0173，R²= 0.9992

全铁含量(mg/kg)=(△A+0.0173)÷ 0.1569×V反总÷(W×V样÷V样总)= 254.94×(△A+0.0173)÷W

V反总:反应总体积，0.2mL；V样:反应体系中加入样本体积，0.02mL；V样总:加入提取液体积，4mL，W:样本质量，g

b.用 96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.0785x -0.0173，R²= 0.9992

全铁含量(mg/kg)=(△A+0.0173)÷ 0.0785×V反总÷(W×V样÷V样总)= 509.55×(△A+0.0173)÷W

V反总:反应总体积，0.2mL；V样:反应体系中加入样本体积，0.02mL；V样总:加入提取液体积，4mL，W:样本质量，g