半岛bd体育手机客户端 介绍
正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义: S-AI在 pH为 4.5~5.0(酸性)条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。 测定原理: S-AI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在 510nm有特征光吸收,在一定范围内 510nm光吸收增加速率与 AI活性成正比。 自备用品: 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。 试剂组成和配制: 试剂一:液体 50mL×1瓶,4℃保存; 试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入 25mL试剂一充分溶解备用;用不完的试剂 4℃保存; 试剂三:液体 20mL×1瓶,4℃保存; 样品处理: 新鲜土样自然风干或 37度烘箱风干,过 30~50目筛。 测定步骤和加样表:
混匀, 37℃准确水浴 30min,95℃水浴 10min左右(盖紧,以防水分散失),流水冷却,充分混匀(以保证浓度不变),10000g 25℃离心 10min,取上清液
混匀,95℃水浴 10min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀, 510nm处,蒸馏水调零,记录各管吸光值 A,如果吸光值大于 2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数),ΔA=A测定-A对照。 S-AI活性计算: 标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0016x -0.001;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。 单位的定义:每天每 g土样中产生 1mg还原糖定义为一个 S-AI活力单位。 S-AI活力(μg/d/g土样)=[(ΔA +0.001)÷0.0016×V反总÷W÷T÷1000=240×(ΔA+0.001) V反总:反应体系总体积:0.8mL;T:反应时间,1/48d;W:样本质量,0.1g;1000:1mg=1000μg。 |
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