正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

S-AI在 pH为 4.5～5.0(酸性)条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。

测定原理：

S-AI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在 510nm有特征光吸收，在一定范围内 510nm光吸收增加速率与 AI活性成正比。

自备用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体 50mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入 25mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃保存；

试剂三：液体 10mL×1瓶，4℃保存；

样品处理：

新鲜土样自然风干或 37度烘箱风干，过 30～50目筛。

测定步骤和加样表：

试剂名称(μL)	测定管	对照管
风干土样(g)	0.05	0.05
试剂一		400
试剂二	400

混匀， 37℃准确水浴 30min后，95℃水浴 10min(盖紧，以防水分散失)，流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变)，10000g 25℃离心 10min，取上清液

上清液	200	200
试剂三	100	100

混匀，95℃水浴 10min(盖紧，以防止水分散失)，流水冷却后充分混匀， 510nm处，记录各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数)，ΔA=A测定-A对照。

S-AI活性计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0016x -0.001；x为标准品浓度(μg/mL)，y为吸光值。

单位的定义：每天每 g土样中产生 1mg还原糖定义为一个 S-AI活力单位。

S-AI活力(mg/d/g土样)＝[(ΔA +0.001)÷0.0016×V反总÷W÷T÷1000=240×(ΔA+0.001)

V反总：反应体系总体积：0.4mL；T：反应时间，1/48d； W：样本质量，0.05g；1mg=1000μg。

b.用 96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0008x -0.001；x为标准品浓度(μg/mL)，y为吸光值。

单位的定义：每天每 g土样中产生 1mg还原糖定义为一个 S-AI活力单位。

S-AI活力(mg/d/g土样)＝[(ΔA +0.001)÷0.0008×V反总÷W÷T÷1000=480×(ΔA+0.001)

V反总：反应体系总体积：0.4mL；T：反应时间，1/48d； W：样本质量，0.05g；1mg=1000μg。