试剂 半岛游戏平台官网入口网址 设备 原料
银牌会员第 5
访问量: 2315431 网址:hydranal.cnreagent.com 在线留言
半岛bd体育手机客户端 搜索
检测试剂盒 >> 生化试剂盒
酸性蛋白酶测试盒(微量法)
酸性蛋白酶测试盒(微量法)图片
货号: ACPT-1-W
包装: 100管/48样
索取资料及报价
货号: ACPT-1-W
半岛bd体育手机客户端 介绍

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

ACP是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。

测定原理:

酸性条件下,ACP催化酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;钨蓝在 680nm有特征吸收峰,通过测定其吸光度增加,来计算 ACP活性。

自备半岛游戏平台官网入口网址 和样品:

水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、0.5 mL EP管和蒸馏水。

试剂组成和配置:

液体一:2mL×1支,4℃保存。

液体二:1mL×1支,4℃保存。

试剂一的配制:临用前按液体一:液体二:蒸馏水=90(μL):20(μL):21(mL)的比例配制,现配现用,如出现白色絮状沉淀则不能用。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加 4mL蒸馏水溶解。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加入 10mL试剂一,沸水浴中磁力搅拌溶解。(可在烧杯上盖一层保鲜膜,注意观察,避免水分全部蒸发,一般加热 15-30分钟,该试剂为过饱和试剂,充分混匀后仍出现颗粒物不溶物不影响使用)。

试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入 20mL蒸馏水溶解。试剂五:液体 4mL×1瓶,4℃保存。

标准品:液体 1mL×1支,0.25μmol/mL标准酪氨酸溶液,4℃保存。

粗酶液提取:

1、试剂一的配制:见试剂的组成和配制。

2、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10的比例(建议称取约 0.1g组织,加入 1mL试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心 10min,取上清,即粗酶液。

3、血清或培养液:直接测定。

4、细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1的比例(建议 500万细胞加入 1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

测定操作:

1.分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长到 680 nm,蒸馏水调零。

2.试剂二、试剂三和试剂四置于 30℃水浴保温 30min。

3.对照管:取 0.5 mL EP管,加入 20μL粗酶液,40μL试剂二,混匀后置于 30℃水浴保温10min;加入 40μL试剂三,混匀后 8000g,4℃离心 10min;取 40μL上清液,加入新的 EP管,再加入 200μL试剂四,40μL试剂五,混匀后置于 30℃水浴保温 20min,取 200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,680nm测定光吸收,记为 A对照管。

4.测定管:取 0.5 mL EP管,加入 20μL粗酶液,40μL试剂三,混匀后置于 30℃水浴保温10min;加入 40μL试剂二,混匀后 8000g,4℃离心 10min;取 40μL上清液,加入新的 EP管,再加入 200μL试剂四,40μL试剂五,混匀后置于 30℃水浴保温 20min,取 200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,于 680nm测定光吸收,记为 A测定管。(注意与空白管不同,先加试剂三,后加试剂二)

5.空白管:取 0.5 mL EP管,加入 40μL蒸馏水,200μL试剂四,40μL试剂五,混匀后置于30℃水浴保温 20min,取 200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,于 680nm测定光吸收,记为 A空白管。

6.标准管:取 0.5 mL EP管,加入 40μL标准品,200μL试剂四,40μL试剂五,混匀后置于30℃水浴保温 20min,取 200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,于 680nm测定光吸收,记为 A标准管。

ACP活性计算公式:

1.按照样本蛋白浓度计算

ACP活性单位定义:30℃每毫克蛋白每分钟水解产生 1nmol酪氨酸为 1个酶活单位。

ACP活性(nmol/min/mg prot)= C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总÷(Cpr×V1)÷T= 125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr

2.按照样本质量计算

ACP活性单位定义:30℃每克样品每分钟催化水解产生 1 nmol酪氨酸为 1个酶活单位。

ACP活性(nmol/min/g鲜重)=C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总÷(W×V1÷V2)÷T= 125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W

3.按照液体体积计算

ACP活性单位定义:30℃每毫升样品每分钟催化水解产生 1nmol酪氨酸为 1个酶活单位。

ACP活性(nmol/min/mL)=C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总÷V1÷T= 125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)

1.按照细胞数量计算

ACP活性单位定义:30℃每 104个细胞每分钟催化水解产生 1nmol酪氨酸为 1个酶活单位。

ACP活性(nmol/min/104 cell)=C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总÷(细胞数量×V1÷V2)÷T= 125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷细胞数量

C标准品:0.25 μ mol/mL标准酪氨酸溶液;V反总:酶促反应总体积,0.1mL;Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL);V1:加入反应体系中粗酶液体积(mL),0.02 mL;V2:提取液总体积(mL),1mL;T:催化反应时间(min),10min;W:样品质量(g)。

注意事项:

1.试剂一按操作指示配制,用多少配多少,出现白色絮状沉淀则不能用。

2.临用前配制的试剂配置好后 3天内使用完毕。

相关半岛bd体育手机客户端
我要咨询 关闭
  • 姓名*
  • 电话*
  • 单位*
  • email
  • 留言内容*
  • 验证码*
  • 让更多商家关注
  • Baidu
    map