注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

速效磷是土壤中可被植物吸收的磷组分，包括全部水溶性磷、部分吸附态磷及有机态磷，土壤中速效磷是限制植物生长主要因子之一。

测定原理

用双酸法提取酸溶性磷和吸附态磷，用钼锑抗比色法测定。

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天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、震荡仪。

试剂组成和配制

提取液：液体 100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体 6mL×1支，4℃保存。

试剂二：粉剂×1支，4℃避光保存。临用前加 2mL蒸馏水溶解。用不完的试剂 4℃保存。

试剂三：粉剂×3支，4℃避光保存。临用前加 1mL蒸馏水溶解。现配现用。

样本处理

新鲜土样风干，过 30-50目筛，按照土壤质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5～10的比例(建议称取约 0.1g土样，加入 1mL提取液)，振荡提取 30min，10000g ，25℃离心 10min，取上清液待测。

测定步骤

1、显色液的配制(可测 50个样)：取 EP管一支，加入 660μL试剂一，再加入 100μL试剂二，充分混匀后，再加入 240μL试剂三，充分混匀待用；配好的显色液应为黄色，若变蓝则为磷污染；显色液必须现配现用；若一次性测不了 50个样，可按比例缩小各试剂体积。

2、操作表

	空白管	测定管
样本(μL)		40
提取液(μL)	40
显色液(μL)	20	20
H2O(μL)	140	140
充分混匀，25℃静置 30min
于微量石英比色皿/96孔板中，蒸馏水调零，测定 660nm处吸光值 A，分别记为 A空白管和 A测定管，△A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。

计算公式

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y =0.1252x-0.0041，R²= 0.9957，x为标准品浓度(mg/L)，y为吸光值。

速效磷含量(mg/kg干重)=(△A+0.0041)÷ 0.1252×V样÷(W×V样÷V样总)= 7.987×(△A+0.0041)÷W

V样：样本体积，0.04mL；V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，约 0.1g

b.用 96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y =0.0626x-0.0041，R²= 0.9957，x为标准品浓度(mg/L)，y为吸光值。

速效磷含量(mg/kg干重)=(△A+0.0041)÷ 0.0626×V样÷(W×V样÷V样总)= 15.97×(△A+0.0041)÷W

V样：样本体积，0.04mL；V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，约 0.1g

注意事项

1.配好的显色液当天用完，变蓝则不能使用。

2.ΔA线性范围为：0.01-1.5。

3.标准曲线线性范围为：0.1mg/L-20mg/L。