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胼胝质含量测试盒(荧光法)
胼胝质含量测试盒(荧光法)图片
货号: PZZ-1-Y
包装: 100管/96样
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货号: PZZ-1-Y
半岛bd体育手机客户端 介绍

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

胼胝质(callose)是围绕每个筛孔的边缘积累的碳水化合物,是一种以 β-1,3键结合的葡聚糖,在植物的筛管代谢、配子体发育等生命活动中发挥着重要的调节作用,其合成、分解直接关系植物正常的生长代谢过程。

测定原理:

胼胝质与苯胺蓝染料反应,产生荧光物质,在激发波长 400nm,发射波长 500nm下荧光强度。

自备半岛游戏平台官网入口网址 和用品:

研钵、冰、低温离心机、荧光酶标仪、黑色 96孔板、可调式移液器、乙醇和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 110mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1瓶,4℃避光保存;临用前加入 10mL蒸馏水充分溶解待用。

试剂二:液体 6mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体 15mL×1瓶,4℃保存。标准品:粉剂×1管,4℃保存。

样品中胼胝质提取:

切取约 0.1g样本于 EP管(不要研磨),用 98%的乙醇浸泡过夜。然后弃掉乙醇,加入 1mL提取液,充分匀浆,80℃水浴 20min,10000g 25℃离心 10min,取上清待测。

测定操作:

标准品溶液配制

在标准品中加入 1mL提取液,充分溶解,得到浓度为 10mg/mL的胼胝质标准溶液。按以下比例配制成不同浓度的标准品。

标准品浓度(mg/mL) 10 8 6 4 2
标准品(μL) 200 160 120 80 40
提取液(μL) 0 40 80 120 160

样本测定

在 EP管中依次加入如下试剂

试剂名称(μL) 测定管
样本上清或标准品溶液 40
试剂一 80
试剂二 40
充分震荡混匀
试剂三 120

充分混匀,50℃水浴 30min,然后室温放置 1h,直至溶液蓝色褪去。如果蓝色仍未褪去,可以继续 50℃水浴直至蓝色消失。

取 200μL于黑色 96孔板,激发波长 400nm,发射波长 500nm,测定荧光强度,记作 A。

胼胝质含量计算:

1.标准曲线

以标准品浓度 mg/mL为横坐标,荧光强度为纵坐标,制作标准曲线。

2.胼胝质含量计算

根据标准曲线得到样本上清中胼胝质的浓度(mg/mL)

样品中胼胝质含量(mg/g鲜重)=样本上清中胼胝质的浓度(mg/mL)÷(样本质量(g)÷提取液体积(mL))=样本上清中胼胝质的浓度(mg/mL)÷0.1

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