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土壤β-木糖苷酶(S-β-XYS)测试盒(荧光法)
土壤β-木糖苷酶(S-β-XYS)测试盒(荧光法)图片
货号: SBXYS-3-Y
包装: 100管/96样
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半岛bd体育手机客户端 介绍

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体,是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶,产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外,β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业,比传统的漂白法环保,具有广泛的应用价值。

测定原理:

4-羟甲基-7-香豆素(MUB)在 365 nm波长处激发,能在 470 nm处检测到荧光,它与某些物质结合后荧光特性消失,通过酶的水解作用 MUB释放出来,通过检测荧光量来表征酶活性。

自备半岛游戏平台官网入口网址 和用品:多功能酶标仪、恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体 120mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。用前加 11 mL蒸馏水充分溶解。

试剂三:液体 10mL×1瓶,4℃保存。

粗酶液提取:

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50目筛。按照土壤质量(g):试剂一 mL)为 1:5~10的比例(建议称取约 0.1g土壤,加入 1mL试剂一),振荡混匀。

测定步骤:

1.测定管:在震荡条件下取 100 μL土壤悬液到 EP管中,加入 100 μL试剂二,30℃震荡避光培养 3 h,从中吸取 134 μL到黑色不透光 96孔板中,加入 66 μL试剂三后用多功能酶标仪进行检测,激发光波长 365 nm,测定波长 470nm。

2.对照管:取 100 μL蒸馏水到 EP管中,加入 100 μL试剂二,30℃震荡避光培养 3 h,从中吸取 134 μL到黑色不透光 96孔板中,加入 66 μL试剂三后用多功能酶标仪进行检测,激发光波长 365 nm,测定波长 470nm。 ΔA=A测定-A对照

注意:对照管只需测定一次。

土壤β木糖苷酶活性计算公式:

标准曲线:y = 62629x - 2266.4 R2= 0.9996 x:MUB标准品浓度(nmol/mL)

y:荧光强度酶活(nmol/h/g土样)=(ΔA+2266.4)÷62629×V÷T÷W=(ΔA+2266.4)÷187887÷W

V:提取液体积,1 mL;W:土壤样品质量,g;T:催化反应时间,3 h。

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