注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

H2S是一种新型气态信号分子，存在于脑内的神经递质，生理浓度的 H2S对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用，并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。

测定原理：

H2S与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝，亚甲基蓝在 665nm处有最大吸收峰，通过测定其吸光值可计算 H2S含量。

自备实验用品及半岛游戏平台官网入口网址 ：

天平、低温离心机、酶标仪、96孔板、蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体 25mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体 16mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体 8mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体 8mL×1瓶，4℃保存。

试剂五：液体 1.5mL×1管，4℃避光保存。

样品处理：

1.组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5～10的比例(建议称取约 0.1g组织，加入 1mL提取液)进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2.细菌、真菌：按照细胞数量(10⁴个)：提取液体积(mL)为 500～1000：1的比例(建议 500万细胞加入 1mL提取液)，冰浴超声波破碎细胞(功率 300w，超声 3秒，间隔 7秒，总时间 3min)；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3.血清(浆)：直接测定。

操作表：

1、酶标仪预热 30min，调节波长至 665nm。

2、操作表

	空白管	测定管
样品(μL)		150
H2O(μL)	150
试剂一(μL)	150	150
充分震荡混匀
试剂二(μL)	150	150
10000g，4℃，离心 10min，去上清，留沉淀
H2O(μL)	150	150
10000g，4℃，离心 10min，去上清，留沉淀
试剂一(μL)	75	75
试剂三(μL)	75	75
充分震荡混匀
	75	75
10000rpm，4℃，离心 10min，吸取 200μL上清于 96孔板中
试剂五(μL)	10	10

H₂S含量计算公式：

用 96孔板测定的计算公式如下

标准曲线回归方程为：y = 0.0022x，R2 = 0.9988

(1)组织样品

a.按照蛋白浓度计算

H2S(nmol/mg prot)=ΔA/ 0.0022×V反总÷(V样×Cpr)=681.8×ΔA÷Cpr

b.按照样本重量计算

H2S(nmol/g鲜重)=ΔA/ 0.0022×V反总÷(V样÷V样总×W)= 681.8×ΔA÷W

(3)细胞

H2S(nmol/10⁴cell)=ΔA/ 0.0022×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量(万个))=681.8×ΔA÷细胞数量(万个)

(2)液体样品

H2S(nmol/mL)=ΔA/ 0.0022×V反总÷V样= 681.8×ΔA

V反总：反应总体积，0.225mL；V样：反应中样品体积，0.15mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL

注意事项

最低检出限为 1nmol/mL。