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硫代葡萄糖苷含量测试盒(微量法)
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货号: SPT-1-W
包装: 100管/48样
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半岛bd体育手机客户端 介绍

注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

硫代葡萄糖苷(Glucosinolates),简称硫苷,是十字花科蔬菜中的一种重要的次生代谢产物,根据侧链基团的不同,可以把硫苷分为脂肪族、芳香族和吲哚族三大类。

测定原理

硫葡糖苷酶催化硫代葡萄糖苷反应产生葡萄糖。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在 505 nm有特征吸收峰。

自备实验用品及半岛游戏平台官网入口网址

天平、研钵、离心机、酶标仪、96孔板、恒温水浴锅、蒸馏水。

试剂组成和配制

试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存,临用前加入 0.6mL试剂二溶解待用,用不完的试剂分装后-20℃保存;

试剂二:液体 5mL×1瓶,4℃保存;

试剂三:液体 8mL×1瓶,4℃避光保存;试剂四:液体 8mL×1瓶,4℃避光保存。

样本处理

样本烘干粉碎,过 100目筛。称 0.1g样本,加入 1mL蒸馏水,100℃水浴提取 60min。冷却至室温,10000g 4℃离心 10min,取上清待测。

测定操作

在 96孔板中加入如下试剂


对照管 测定管
样品(μL) 50 50
试剂一(μL)
10
试剂二(μL) 10
充分混匀,37℃反应 120min
试剂三(μL) 70 70
试剂四(μL) 70 70
充分混匀,37℃反应 30min,测定 505nm处吸光值,记为 A对照和 A测定,△A=A测定-A对照。

计算公式

标准曲线:y = 0.9345x + 0.0043,R2 = 0.9999;x为标准品浓度:μmol/mL;y为吸光度△A。

硫代葡萄糖苷含量(μmol/g鲜重)=(△A -0.0043)÷ 0.9345×V样÷(V样÷V样总×W )=1.07×(△A -0.0043)÷ W

V样,加入样本上清体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g。

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