注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

硫代葡萄糖苷(Glucosinolates)，简称硫苷，是十字花科蔬菜中的一种重要的次生代谢产物，根据侧链基团的不同，可以把硫苷分为脂肪族、芳香族和吲哚族三大类。

测定原理

硫葡糖苷酶催化硫代葡萄糖苷反应产生葡萄糖。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在 505 nm有特征吸收峰。

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天平、研钵、离心机、酶标仪、96孔板、恒温水浴锅、蒸馏水。

试剂组成和配制

试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存，临用前加入 0.6mL试剂二溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存；

试剂二：液体 5mL×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体 8mL×1瓶，4℃避光保存；试剂四：液体 8mL×1瓶，4℃避光保存。

样本处理

样本烘干粉碎，过 100目筛。称 0.1g样本，加入 1mL蒸馏水，100℃水浴提取 60min。冷却至室温，10000g 4℃离心 10min，取上清待测。

测定操作

在 96孔板中加入如下试剂

	对照管	测定管
样品(μL)	50	50
试剂一(μL)		10
试剂二(μL)	10
充分混匀，37℃反应 120min
试剂三(μL)	70	70
试剂四(μL)	70	70
充分混匀，37℃反应 30min，测定 505nm处吸光值，记为 A对照和 A测定，△A=A测定-A对照。

计算公式

标准曲线：y = 0.9345x + 0.0043，R2 = 0.9999；x为标准品浓度：μmol/mL；y为吸光度△A。

硫代葡萄糖苷含量(μmol/g鲜重)=(△A -0.0043)÷ 0.9345×V样÷(V样÷V样总×W )=1.07×(△A -0.0043)÷ W

V样，加入样本上清体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g。