注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

总磷酸盐包含正磷酸盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、多聚磷酸盐等各种磷酸盐的形式，反应了水土中的磷酸盐水平，是一个水质和土壤质量评价的重要指标。测定原理在酸性溶液中，在分解剂和高温条件下，将无机磷酸盐和有机磷酸盐水解成正磷酸盐，正磷酸盐可与钼酸铵反应成磷钼酸，在还原剂存在时被还原为磷钼蓝，在 710nm处有特征吸收峰。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品

天平，震荡仪、常温离心机、酶标仪、96孔板、蒸馏水。

试剂组成和配制

试剂一：液体 20mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体 40mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体 4mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加 4mL蒸馏水充分溶解，然后将试剂五全部加入试剂四中充分混匀。

试剂五：液体×1支，4℃保存。

样品处理

1.水样：按照水样体积(mL)：试剂一体积(mL)：试剂二体积(mL)为 10:1:2的比例(建议取 1mL水样，加入 100μL试剂一和 200μL试剂二)95℃沸水浴 30min，冷却后待测。

2.土样：按照土壤质量(g)：蒸馏水体积(mL)：试剂一体积(V)：试剂二体积(V)=1：10:1:2(建议称取约 0.1g土样，加入 1mL蒸馏水，再加入 100μL试剂一和 200μL试剂二)，95℃沸水浴振荡 30min，10000g ，25℃离心 10min，取上清液待测。

测定操作表

	空白管	测定管
样本(μL)		40
试剂三(μL)	40	40
试剂四(μL)	40	40
蒸馏水(μL)	120	80
充分混匀，25℃静置 10min，于 96孔板测定 710处吸光值 A，分别记为 A空白管和 A测定管，△A=A测定管-A空白管

计算公式

标准曲线：y = 0.0237x + 0.0016，R2 = 0.9989；x为 PO4浓度 μg/mL，y为吸光值△A。

1.水样：

总磷酸盐含量(μg/mL)= (△A-0.0016)÷0.0237×V样÷(V样÷V样总)= 54.8×(△A-0.0016)

2.土样：

总磷酸盐含量(μg/g)= (△A+0.0063)÷0.0489×V样÷(W×V样÷V样总)=54.8×(△A+0.0063)÷W

V样：加入样本体积；0.04mL；V样总：样本总体积，1.3mL；W，土样质量，g。

注意事项

1.配制的试剂四一周内使用完。

2.检出限为 65μg/mL或 65μg/g。