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总黄酮醇含量测试盒(微量法)
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半岛bd体育手机客户端 介绍

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

黄酮醇广泛存在于各种植物中,具有很强的抗氧化和清除自由基能力,国内外已对其生理功能或药理做了大量研究。

测定原理:

在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下,黄酮醇与铝盐生成螯合物,加入氢氧化钠溶液后显红橙色,在 510nm 处有最大吸光值。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品:

酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔酶标板、研钵、冰、蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:液体 60 mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:液体 2 mL×1 管,4℃保存;

试剂三:液体 2 mL×1 管,4℃保存;

试剂四:液体 12 mL×1 瓶,4℃保存。

黄酮醇的提取:

1. 组织:按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一),进行匀浆,超声提取 30min,8000g,25℃离心 10min,取上清待测。

2. 血清(浆)等液体样品:直接测定。

测定步骤:

1. 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 510nm。

2. 样本测定

按下表在 EP 管中加入如下试剂

试剂名称(μL) 测定管 对照管
样本 100 100
试剂二 15
混匀,室温放置 5 min
试剂三 15
混匀,室温放置 6 min
试剂四 100 100
蒸馏水 200 230
混匀,室温放置 10 min

取 200μL 转移至 96 孔板中,于 510nm 处分别读取测定管和对照管吸光值,分别记为 A 测定和 A 对照,计算△A=A 测定-A 对照。每个测定管设一个对照管。

黄酮醇含量计算:

标准条件下测定回归方程为 y = 1.5272x - 0.01 R2= 0.9994;

x 为芦丁含量(mg/mL),y 为吸光值差值△A。

1. 按照血清(浆)体积计算

黄酮醇含量(mg/mL)= (△A+0.01)÷1.5272=0.65×(△A+0.01)

2. 按照样品质量计算

黄酮醇含量(mg/g 鲜重)= [ (△A+0.01)÷1.5272×V1]÷(W ×V1÷V2)= 0.65×(△A+0.01)÷W

V1:加入反应体系中样本体积,0.1 mL;V2:加入提取液体积,1 mL; W:样本质量,g;

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