正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

土壤芳基硫酸酯酶来自于土壤微生物，能酶促土壤有机硫化物转化为植物可吸收的无机态硫，在硫素的生物化学循环和植物的硫营养代谢中具有重要的作用，是反映土壤质量的一个重要生物学指标。

测定原理：

S-ASF 能够催化对-硝基苯硫酸钾生成对-硝基苯酚，后者在 410nm 有特征光吸收。

自备用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：甲苯 5mL×1 瓶，4℃保存(自备)；

试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：粉剂×2 支，-20℃保存；临用前加入 1.25mL 蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存；

试剂四：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；

试剂五：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；

样品处理：

新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30～50 目筛。

测定步骤：

试剂名称	测定管	对照管
风干土样(g)	0.05	0.05
试剂一(μL)	12.5	12.5

振荡混匀，使土样全部湿润，室温放置 15min

试剂二(μL)	200	200
试剂三(μL)	50
蒸馏水(μL)		50

混匀， 37℃水浴 1h 后

试剂四(μL)	50	50
试剂五(μL)	200	200

充分混匀，室温静置 2min 后，10000g 25℃离心 10min，取 200μL 上清液于 410nm 处测定吸光值 A，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。

S-ASF 活力计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0066x -0.013；x 为标准品浓度(μmol/L)，y 为吸光值。

单位的定义：每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-ASF 活力(μmol/d/g 土样)＝ (ΔA+0.013)÷0.0066×V 反总÷W÷T =19.09×(ΔA+0.013)

T：反应时间，1h=1/24d；V 反总：反应体系总体积：2.625×10^-4L；W：样本质量，0.05g。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0033x -0.013；x 为标准品浓度(μmol/L)，y 为吸光值。

单位的定义：每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-ASF 活力(μmol/d/g 土样)＝ (ΔA+0.013)÷0.0033×V 反总÷W÷T =38.19×(ΔA+0.013)

T：反应时间，1h=1/24d； V 反总：反应体系总体积：2.625×10^-4L；W：样本质量，0.05g。