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总多糖含量测试盒(微量法)
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货号: ZDT-1-Y
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半岛bd体育手机客户端 介绍

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

多糖是生物体中广泛存在的物质,是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物,它是生物体内重要的生物大分子,是维持生命活动正常运转的基本物质之一。

测定原理

利用水提醇沉法提取总多糖,苯酚-硫酸法测定总多糖含量。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品

酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、无水乙醇、浓硫酸、蒸馏水、水浴锅。

试剂的组成和配制

试剂一:12mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:无水乙醇,自备;

试剂三:浓硫酸,自备。

总多糖提取

样本烘干粉碎,称取约 0.05g 样本,加入 1mL 水,充分匀浆。100℃水浴提取 2h(必须盖紧盖子防止水分流失),冷却后 10000g 离心 10min,取上清。吸取 0.2mL 上清,慢慢加入 0.8mL 无水乙醇,混匀后 4℃静置过夜,10000g 离心10min,弃上清,沉淀中加入 1mL 水,充分混匀溶解沉淀后待测。

测定步骤

1、酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 490nm。

2、吸取 200μL 待测样本,加入 100μL 试剂一和 0.5mL 浓硫酸,混匀后 90℃水浴 20min,流水冷却。取 200μL 加入酶标板,于 490nm 下测定吸光值 A。

总多糖含量计算

以葡萄糖作为对照品,标准条件下测定回归方程为 y = 7.981x - 0.0037,R2 = 0.9973,x 为葡萄糖含量(mg/mL),y 为吸光值。

总多糖含量(μg/g 干重)= (A +0.0037)÷7.981×V1÷V2×V3÷W×1000=626.49×(A+0.0037)÷W

V1:醇沉后重新溶解后的体积,1mL;V2:进行醇沉的体积,0.2mL;V3,提取时加入水的体积,1mL;W:样本质量,g;1000,mg 到 μg 的换算系数。

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