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考马斯亮蓝法蛋白含量测试盒(微量法)
考马斯亮蓝法蛋白含量测试盒(微量法)图片
货号: KMSP-1-W
包装: 100管/96样
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货号:KMSP-1-W
半岛bd体育手机客户端 介绍

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

测定原理:

在酸性溶液中,考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合形成蓝色复合物;该复合物在 620nm 处有最大吸收峰,其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。该方法灵敏度高,适合微量蛋白质分析。

自备半岛游戏平台官网入口网址 和用品:

离心机、酶标仪、96 孔板、移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体 11 mL×1 瓶,4℃保存。

样品中可溶性蛋白质提取:

1.   液体样品:澄清液体样品可以直接测定。

2.   组织样品:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:20 的比例(建议称取约 0.05 g 组织,加入 1mL 提取液(自备,根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水)) 冰浴匀浆,8000g,4℃离心 10min,取上清,即待测液。(动物样品常常需要稀释)

3.   细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1  的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

测定操作:

1. 酶标仪预热 30 min。

2. 在 96 孔板中加入:

试剂(μL)测定管空白管
样本100
蒸馏水
100
试剂一100100
混匀后,测定波长 620 nm 吸光值,△A=A测定-A 空白。

注意:

1、 空白管只需要测定一次。2、 测定管的待测样品蛋白质浓度要控制在 1-100μg/mL 范围内,尽量控制在中间范围。3、 测定管若出现浑浊或分层现象,就说明蛋白含量较高,通常须将待测液用提取液稀释10~20 倍后重新检测。

计算公式:

标准曲线:y = 7.1265x - 0.0007;R2 = 0.9997;
x:  蛋白标准品浓度(mg/mL;线性范围为 0.001~0.1mg/mL); y: 吸光值差值

1.按液体样本体积计算:Cpr(mg/mL)=(△A+0.0007)÷7.1265=0.1403×(△A+0.0007)

2.按组织样本质量计算:  Cpr(mg/g 鲜重)=(△A+0.0007)÷7.1265×V 总÷W=0.1403×(△A+0.0007)÷W

V 总:提取液体积,1 mL; W:样本质量,g。

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