注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

半纤维素是植物细胞壁中与纤维素紧密结合的多糖混合物，是构成细胞初生壁的主要成分，广泛存在于植物中，是一种新型可利用能源。

测定原理

半纤维素经酸处理后转化成还原糖，与 DNS 生成红棕色物质，在 540nm 有特征吸收峰，其吸光值的大小反映了半纤维素含量的高低。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品

天平、40 目筛，恒温水浴锅、烘箱、酶标仪、96 孔板、80%乙醇、丙酮

试剂组成和配制

试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。如有沉淀，80℃加热溶解。

试剂二：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 60mL×1 瓶，4℃保存。 试剂四：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

样品处理

1、样品 80℃烘干至恒重，粉碎，过 40 目筛。称取 0.01g 样本，加入 80%乙醇 1mL，90℃水浴 30min，冷却至室温，8000g 25℃离心 10min，弃上清留沉淀，80℃烘干。

2、在上述烘干的沉淀中加入 1mL 试剂一，充分混匀后，95℃水浴 60min，取出冷却后，8000g 25℃离心 10min，弃上清留沉淀，用蒸馏水清洗 3 次(加入 1mL 蒸馏水混匀即可)，8000g 25℃离心 10min，弃上清留沉淀，再用丙酮清洗 1 次(加入 1mL 丙酮混匀即可)，8000g 25℃ 离心 10min，弃上清留沉淀，80℃烘干。

3、在上述烘干的沉淀中加入 1mL 试剂二，95℃水浴 30min，取出冷却后，8000g 25℃离心10min。取上清 500μL，加入 500μL 试剂三，混匀后待用。

注意：

1、80℃烘干的时间为 2 小时，依据样本情况可延长烘干时间。

2、90℃或 95℃加热过程中 EP 管可能爆开，建议用胶带封口或使用带螺旋盖的防爆 EP 管。

测定操作表

在 EP 管中依次加入如下试剂

	空白管	测定管
上清(μL)		60
蒸馏水(μL)	60
试剂四(μL)	45	45
蒸馏水(μL)	195	195
充分混匀，90℃水浴5min，自然冷却，25℃，8000g离心10min，取200μL上清液于96孔板，测定540nm处吸光值A。分别记为A空白管和A测定管，ΔA=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。

计算公式

1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.2906x + 0.0609，R²= 0.9931；x 为标准品浓度(mg/mL)，y 为吸光值。

2、半纤维素含量(mg/g 干重)=(△A- 0.0609)÷ 0.2906÷(W÷V 样总)= 6.88×(△A- 0.0609)÷W

W：样品质量，g；V 样总：加入提取液体，2mL。