注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL)广泛存在于百合科葱属(如大蒜和洋葱)，十字花科芸薹属(如卷心菜，菜花，西兰花)，以及豆科中的合金欢属中，并通常被称为蒜氨酸酶(Alliinase)。 香菇酸在γ-谷氨酰转肽酶和半胱氨酸亚砜裂解酶的作用下转化成香菇精，以及产生丙酮酸、 乙醛、甲醛和 NH3。CSL 是内源性甲醛生成的关键酶之一，测定 CSL 活性对于研究食品安全具有重要意义。

测定原理

CSL 催化 S-甲基-L-半胱氨酸亚砜反应产生丙酮酸，与 2,4-二硝基苯肼反应，在碱性条件下显棕红色，在 510nm 下有特征吸收峰。

自备实验用品及半岛游戏平台官网入口网址

天平、研钵、离心机、酶标仪、96 孔板、恒温水浴锅、蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1 瓶，4℃避光保存，临用前加入 2mL 水溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存，临用前加入 10mL 水溶解，用不完的试剂分装后-20℃ 保存；

试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。 试剂四：液体 6mL×1 瓶，4℃避光保存。 试剂五：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。

样本处理

按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5～10 的比例(建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液)，进行冰浴匀浆，4℃浸提 40min。12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定操作

	对照管	测定管
样品(μL)	50	50
试剂一(μL)		25
蒸馏水(μL)	25
试剂二(μL)	25	25
充分混匀，37℃反应 20min
试剂三(μL)	100	100
试剂四(μL)	50	50
充分混匀，室温反应 5min
试剂五(μL)	250	250
充分混匀，静置 5min，吸取 200μL 至 96 孔板，测定 510nm 处吸光值，记为 A 对照和 A 测定，△A=A 测定-A 对照。每个测定管设一个对照管。

计算公式

标准曲线：y = 0.7313x + 0.0027，R2 = 0.9993；x 为标准品浓度：μmol/mL；y 为吸光度△A

1. 按蛋白含量计算

C-S lyase 活性(μmol/min/mg prot)=(△A -0.0027)÷0.7313×V 样÷(V 样×Cpr )÷T=0.068×(△A-0.0027)÷Cpr

2. 按照样本质量计算

C-S lyase 活性(μmol/min/g 鲜重)=(△A -0.0027)÷0.7313×V 样÷(V 样÷V 样总×W )÷T=0.068×(△A-0.0027)÷W

V 样，加入样本上清体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T，反应时间，20min。

注意事项

1. 若测定结果中吸光值超过 1，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。香菇类样本活性较大，可能需要稀释 80-100 倍。