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土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)测试盒(可见分光光度法)
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)测试盒(可见分光光度法)图片
货号: SNAG-2-Y
包装: 50管/24样
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正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

S-NAG 是溶酶体中的一种酸性水解酶,由土壤微生物分泌。S-NAG 活性变化与机体某些病理状态密切相关。

测定原理:

S-NAG 分解 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在 400nm 有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算 NAG 活性。

自备用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;(自备)

试剂二:粉剂×2 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 6mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;

试剂三:液体 25mL×1 瓶,4℃保存; 试剂四:液体 50mL×1 瓶,4℃保存; 样品处理:

新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50 目筛。

测定步骤:

试剂名称 测定管 对照管
风干土样(g) 0.05 0.05
试剂一(μL) 25 25

室温振荡混匀 15min 90℃振荡混匀 15min
试剂二(μL) 400
蒸馏水(μL)
400
试剂三(μL) 500 500

混匀, 37℃振荡反应 1h 后,立即 90℃水浴 5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却;10000g 25℃离心 10min,取上清液

上清液(μL) 500 500
试剂四(μL) 1000 1000

充分混匀,室温静置 2min 后,400nm 处蒸馏水调零,测定吸光值 A,计算 ΔA=A 测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

S-NAG 活力计算:

标准条件下测定的回归方程为 y = 0.00645x -0.0054;x 为标准品浓度(μmol/L),y 为吸光值。

单位的定义:每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-NAG 活力(μmol/d/g 土样)= (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V 反总÷W÷T =68.84×(ΔA+0.0054) T:反应时间,1h=1/24d; V 反总:反应体系总体积:9.25×10-4L;W:样本质量,0.05g。

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