正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

S-NAG 是溶酶体中的一种酸性水解酶，由土壤微生物分泌。S-NAG 活性变化与机体某些病理状态密切相关。

测定原理：

S-NAG 分解 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在 400nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算 NAG 活性。

自备用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：甲苯 5mL×1 瓶，4℃保存；(自备)

试剂二：粉剂×2 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入 6mL 蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存；

试剂三：液体 25mL×1 瓶，4℃保存； 试剂四：液体 50mL×1 瓶，4℃保存； 样品处理：

新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30～50 目筛。

测定步骤：

试剂名称	测定管	对照管
风干土样(g)	0.05	0.05
试剂一(μL)	25	25
	室温振荡混匀 15min	90℃振荡混匀 15min
试剂二(μL)	400
蒸馏水(μL)		400
试剂三(μL)	500	500

混匀， 37℃振荡反应 1h 后，立即 90℃水浴 5min(盖紧，防止水分散失)，流水冷却；10000g 25℃离心 10min，取上清液

上清液(μL)	500	500
试剂四(μL)	1000	1000

充分混匀，室温静置 2min 后，400nm 处蒸馏水调零，测定吸光值 A，计算 ΔA=A 测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

S-NAG 活力计算：

标准条件下测定的回归方程为 y = 0.00645x -0.0054；x 为标准品浓度(μmol/L)，y 为吸光值。

单位的定义：每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-NAG 活力(μmol/d/g 土样)＝ (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V 反总÷W÷T =68.84×(ΔA+0.0054) T：反应时间，1h=1/24d； V 反总：反应体系总体积：9.25×10^-4L；W：样本质量，0.05g。