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土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)测试盒(荧光法)
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)测试盒(荧光法)图片
货号: SNAG-3-Y
包装: 100管/96样
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注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

土壤 N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)是溶酶体中的一种酸性水解酶,由土壤微生物分泌。在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能,S-NAG 活性变化与机体某些病理状态密切相关。

测定原理:

4-羟甲基-7-香豆素(MUB)在 365 nm 波长处激发, 能在 470 nm 处检测到荧光, 它与某些物质结合后荧光特性消失, 通过酶的水解作用 MUB 释放出来, 通过检测荧光量来表征酶活性。

自备半岛游戏平台官网入口网址 和用品:

多功能酶标仪、恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体 120mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。用前加 11 mL 蒸馏水充分溶解(可 50℃震荡溶解)。

试剂三:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。

粗酶液提取:

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50 目筛。按照土壤质量(g):试剂一 mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 土壤,加入 1mL 试剂一),振荡混匀。

测定步骤:

1. 测定管:在震荡条件下取 100 μL 土壤悬液到 EP 管中,加入 100 μL 试剂二,30℃震荡避光培养 3 h,从中吸取 134 μL 到黑色不透光 96 孔板中,加入 66 μL 试剂三后用多功能酶标仪进行检测,激发光波长 365 nm,测定波长 470nm。

2. 对照管:取 100 μL 蒸馏水到 EP 管中,加入 100 μL 试剂二,30℃震荡避光培养 3 h, 从中吸取 134 μL 到黑色不透光 96 孔板中,加入 66 μL 试剂三后用多功能酶标仪进行检测,激发光波长 365 nm,测定波长 470nm。 ΔA=A 测定-A 对照

注意:对照管只需测定一次。

S-NAG 活性计算公式:

标准曲线:y = 62629x - 2266.4 R2 = 0.9996 x:MUB 标准品浓度(nmol/mL)

y:荧光强度酶活(nmol/h /g 土样)=(ΔA+2266.4)÷62629×V÷T÷W=(ΔA+2266.4)÷187887÷W

V:提取液体积,1 mL;W:土壤样品质量,g;T:催化反应时间,3 h。

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