意义：木聚糖酶 (Neutral xylanase, NEX) (EC 3.2.1.8) 主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被 称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及 β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘 度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于 酿造和饲料工业中，NEX 一般分离自最适生长 pH 为 6-8 的微生物。

原理：NEX 在中性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与 3,5-二 硝基水杨酸发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率，可计算 NEX 活力。

检测方法：微量法

半岛bd体育手机客户端 组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
提取液 ES34	65mL×1 瓶	4℃保存；
AK249-A	10mL×1 瓶	4℃避光保存；
AK249-B	10mL×1 瓶	4℃避光保存；

※ 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

自备用品：

天平、低温离心机、恒温水浴锅，可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

粗酶液提取：

1. 发酵液：发酵液于 8000g，4℃，离心 15min，取上清，作为待测样品。

2. 酶干粉：称约 0.1mg，加缓冲液 1mL，震荡溶解待测。

测定步骤：

1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至540nm。

2. AK249-B、AK249-C 和 AK249-D 置于 30℃水浴保温 30min。

3. 在 0.5 mL EP 管中按顺序加入下列试剂

试剂名称	对照管 (μL)	测定管 (μL)
样品	60	60
提取液 ES34	90	90
AK249-A		60
AK249- B	90
混匀，盖紧瓶盖，50℃水浴，反应30min，立即沸水浴10min 灭活。(注意不要让盖子爆开，以免进水，改变了反应体系)
AK249-A	60
AK249- B		90
混匀，沸水浴显色5min，取200μL 于微量石英比色皿/96 孔板中，对照管调零，测定A540。

中性蛋白酶活性计算公式：

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y = 1.6904x + 0.0058，R2 = 0.9989

1. 发酵液 NEX 活力计算

酶活定义：50℃，pH6.0 条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量 为一个中性木聚糖酶的活力单位。

NEX 活力 (nmol/min/mL) = (A540-0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀释倍数×1000= 657×(A540-0.0058)

2. 酶干粉 NEX 活力计算

酶活定义：50℃，pH6.0 条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一 个中性木聚糖酶的活力单位。

NEX 活力 (nmol/min/mg) = (A540-0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀释倍数×1000÷W= 657×(A540-0.0058)÷W

注： 150：木糖的分子量；T：反应时间，30min；稀释倍数=V 反总÷V 样=300μL÷60μL=5；1000：转化因子，即 1mmol/L=1000μ mol/L；W：样本质量，mg。

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下

1. 发酵液 NEX 活力计算

酶活定义：50℃，pH6.0 条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量 为一个中性木聚糖酶的活力单位。

NEX 活力 (nmol/min/mL) = (A540-0.0058)÷0.8452÷150÷T×稀释倍数×1000= 1314×(A540-0.0058)

2. 酶干粉 NEX 活力计算

酶活定义：50℃，pH6.0 条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一 个中性木聚糖酶的活力单位。

NEX 活力 (nmol/min/mg) = (A540-0.0058)÷0.8452÷150÷T×稀释倍数×1000÷W= 1314×(A540-0.0058) ÷W

注： 150：木糖的分子量；T：反应时间，30min；稀释倍数=V 反总÷V 样=300μL÷60μL=5；

1000：转化因子，即 1mmol/L=1000μ mol/L；W：样本质量，mg。

注意事项：

1. 吸光度变化应该控制在 0.01～0.8 之间，否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的 稀释倍数要相应改变；也可以延长或者缩短反应时间。

2. 试剂盒 2-8℃保存，保质期 3 个月，建议尽快使用。