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中性木聚糖酶检测试剂盒(100T)
中性木聚糖酶检测试剂盒(100T)图片
货号: AK249
包装: 100T/48S
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货号: AK249
半岛bd体育手机客户端 别名: Neutral xylanase Assay Kit(100T)
半岛bd体育手机客户端 介绍

意义:木聚糖酶 (Neutral xylanase, NEX) (EC 3.2.1.8) 主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被 称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及 β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘 度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于 酿造和饲料工业中,NEX 一般分离自最适生长 pH 为 6-8 的微生物。

原理:NEX 在中性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与 3,5-二 硝基水杨酸发生显色反应,在 540nm 处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率,可计算 NEX 活力。

检测方法:微量法

半岛bd体育手机客户端 组成及保存条件:

编号

规格

储存条件

提取液 ES34

65mL×1 瓶

4℃保存;

AK249-A

10mL×1 瓶

4℃避光保存;

AK249-B

10mL×1 瓶

4℃避光保存;

※ 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

自备用品:

天平、低温离心机、恒温水浴锅,可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

粗酶液提取:

1. 发酵液:发酵液于 8000g,4℃,离心 15min,取上清,作为待测样品。

2. 酶干粉:称约 0.1mg,加缓冲液 1mL,震荡溶解待测。

测定步骤:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至540nm。

2. AK249-B、AK249-C 和 AK249-D 置于 30℃水浴保温 30min。

3. 在 0.5 mL EP 管中按顺序加入下列试剂

试剂名称

对照管 (μL)

测定管 (μL)

样品

60

60

提取液 ES34

90

90

AK249-A


60

AK249- B

90


混匀,盖紧瓶盖,50℃水浴,反应30min,立即沸水浴10min 灭活。(注意不要让盖子爆开,以免进水,改变了反应体系)

AK249-A

60


AK249- B


90

混匀,沸水浴显色5min,取200μL 于微量石英比色皿/96 孔板中,对照管调零,测定A540。

中性蛋白酶活性计算公式:

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y = 1.6904x + 0.0058,R2 = 0.9989

1. 发酵液 NEX 活力计算

酶活定义:50℃,pH6.0 条件下,每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量 为一个中性木聚糖酶的活力单位。

NEX 活力 (nmol/min/mL) = (A540-0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀释倍数×1000= 657×(A540-0.0058)

2. 酶干粉 NEX 活力计算

酶活定义:50℃,pH6.0 条件下,每毫克酶每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一 个中性木聚糖酶的活力单位。

NEX 活力 (nmol/min/mg) = (A540-0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀释倍数×1000÷W= 657×(A540-0.0058)÷W

注: 150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V 反总÷V 样=300μL÷60μL=5;1000:转化因子,即 1mmol/L=1000μ mol/L;W:样本质量,mg。

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下

1. 发酵液 NEX 活力计算

酶活定义:50℃,pH6.0 条件下,每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量 为一个中性木聚糖酶的活力单位。

NEX 活力 (nmol/min/mL) = (A540-0.0058)÷0.8452÷150÷T×稀释倍数×1000= 1314×(A540-0.0058)

2. 酶干粉 NEX 活力计算

酶活定义:50℃,pH6.0 条件下,每毫克酶每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一 个中性木聚糖酶的活力单位。

NEX 活力 (nmol/min/mg) = (A540-0.0058)÷0.8452÷150÷T×稀释倍数×1000÷W= 1314×(A540-0.0058) ÷W

注: 150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V 反总÷V 样=300μL÷60μL=5;

1000:转化因子,即 1mmol/L=1000μ mol/L;W:样本质量,mg。

注意事项:

1. 吸光度变化应该控制在 0.01~0.8 之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的 稀释倍数要相应改变;也可以延长或者缩短反应时间。

2. 试剂盒 2-8℃保存,保质期 3 个月,建议尽快使用。

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