意义：植物中脂氧合酶 (Lipoxidase, LOX) 广泛存在于植物组织中，催化不饱和脂肪酸氧化反应，导致膜脂过氧化。在植物的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。

原理：LOX 催化亚油酸氧化，氧化产物在 234nm 处有特征吸收峰；测定 234nm 吸光度增加速率来计算 LOX 活性。

检测方法：微量法

半岛bd体育手机客户端 组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
AK243-A	100ml×1 瓶	4℃保存，含不溶性物质，使用前混匀即可；
AK243-B	20mL×1 瓶	4℃保存；
AK243-C	粉剂×1 瓶	4℃避光保存；临用前加入 2mL AK243-B，充分溶解，滴加 40ul 0.2mol/L NaOH 至溶液澄清。

※ 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

自备用品：

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、可调式移液枪和蒸馏水。

粗酶提取：

按照组织质量(g)：AK243-A 体积(mL)为 1：5～10 的比例(建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL AK243-A)进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。

测定步骤：

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 234 nm，蒸馏水调零。

2. AK243-B 在 25℃水浴中预热 30 min。

3. 在1mL 石英比色皿中依次加入下列试剂

试剂名称	空白管 (μL)	测定管 (μL)
蒸馏水	20
AK243-B	160
AK243-C	20
迅速混匀后于 234nm 比色，记录 15s 和 75s 的吸光值，分别记为 A1 和 A2。
上清液		20
AK243-B		160
AK243-C		20
迅速混匀后于 234nm 比色，记录 15s 和 75s 的吸光值，分别记为 A3 和 A4。

注意：空白管只需测定一次。

LOX 活性计算公式：

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 按照蛋白浓度计算

活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。

LOX 活性 (U/mg prot) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T×1000= 10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr

2. 按照样本质量计算

活性单位定义：25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。

LOX 活性 (U/g) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T×1000= 10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷W

注： Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，需另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂 盒；V 反总：反应体系总体积，200μL=2×10^-4L；V 样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL；W ：样品质量，g；V 样总：上清液总体积，1mL；T：反应时间。

※ 蛋白定量检测建议使用本公司：BCA Protein Assay Kit (C05-02001)

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下

1. 按照蛋白浓度计算

活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。

LOX 活性 (U/mg prot) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T×1000= 10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr

2. 按照样本质量计算

活性单位定义：25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。

LOX 活性 (U/g) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T×1000= 10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷W

注： Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，需另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂 盒；V 反总：反应体系总体积，200μL=2×10^-4L；V 样：加入反应体系中上清液体积，20μL =0.02mL；W ：样品质量，g；V 样总：上清液总体积，1mL；T：反应时间。

注意事项：

1. AK243-C 易自发氧化，从而导致空白管测定值偏高，必须临用前配制，并且当天使用完毕。

2. 样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日完成酶活性测定。