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植物中脂氧合酶(LOX)活性检测试剂盒
植物中脂氧合酶(LOX)活性检测试剂盒图片
货号: AK243
包装: 100T/96S
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货号: AK243
半岛bd体育手机客户端 别名: Plant Lipoxidase Assay Kit
半岛bd体育手机客户端 介绍

意义:植物中脂氧合酶 (Lipoxidase, LOX) 广泛存在于植物组织中,催化不饱和脂肪酸氧化反应,导致膜脂过氧化。在植物的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。

原理:LOX 催化亚油酸氧化,氧化产物在 234nm 处有特征吸收峰;测定 234nm 吸光度增加速率来计算 LOX 活性。

检测方法:微量法

半岛bd体育手机客户端 组成及保存条件:

编号

规格

储存条件

AK243-A

100ml×1 瓶

4℃保存,含不溶性物质,使用前混匀即可;

AK243-B

20mL×1 瓶

4℃保存;

AK243-C

粉剂×1 瓶

4℃避光保存;临用前加入 2mL AK243-B,充分溶解,滴加

40ul 0.2mol/L NaOH 至溶液澄清。

※ 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

自备用品:

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、可调式移液枪和蒸馏水。

粗酶提取:

按照组织质量(g):AK243-A 体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL AK243-A)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。

测定步骤:

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 234 nm,蒸馏水调零。

2. AK243-B 在 25℃水浴中预热 30 min。

3. 在1mL 石英比色皿中依次加入下列试剂

试剂名称

空白管 (μL)

测定管 (μL)

蒸馏水

20


AK243-B

160


AK243-C

20


迅速混匀后于 234nm 比色,记录 15s 和 75s 的吸光值,分别记为 A1 和 A2。

上清液


20

AK243-B


160

AK243-C


20

迅速混匀后于 234nm 比色,记录 15s 和 75s 的吸光值,分别记为 A3 和 A4。

注意:空白管只需测定一次。

LOX 活性计算公式:

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。

LOX 活性 (U/mg prot) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T×1000= 10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr

2. 按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。

LOX 活性 (U/g) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T×1000= 10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷W

注: Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL,需另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂 盒;V 反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4L;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02mL;W :样品质量,g;V 样总:上清液总体积,1mL;T:反应时间。

※ 蛋白定量检测建议使用本公司:BCA Protein Assay Kit (C05-02001)

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下

1. 按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。

LOX 活性 (U/mg prot) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T×1000= 10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr

2. 按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。

LOX 活性 (U/g) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T×1000= 10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷W

注: Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL,需另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂 盒;V 反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4L;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL =0.02mL;W :样品质量,g;V 样总:上清液总体积,1mL;T:反应时间。

注意事项:

1. AK243-C 易自发氧化,从而导致空白管测定值偏高,必须临用前配制,并且当天使用完毕。

2. 样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日完成酶活性测定。

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