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脂肪酸合成酶(FAS)活性检测试剂盒(50T)
脂肪酸合成酶(FAS)活性检测试剂盒(50T)图片
货号: AK240
包装: 50T/48S
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货号: AK240
半岛bd体育手机客户端 别名: Fatty Acid Synthase Assay Kit(50T)
半岛bd体育手机客户端 介绍

意义:脂肪酸合成酶 (Fatty Acid Synthase, FAS) 是脂肪酸合成关键酶,催化乙酰辅酶 A 和丙二酰辅 酶 A 而生成长链脂肪酸。FAS 普遍 表达于各种组织细胞中,在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪 组织中表达丰富。

原理:脂肪酸合成酶催化乙酰 CoA、丙二酰 CoA 和 NADPH 生成长链脂肪酸和 NADP+;NADPH 在 340nm 有吸收峰,而 NADP+没有;通过测定 340nm 光吸收下降速率,计算 FAS 活性。

检测方法:分光光度法

半岛bd体育手机客户端 组成及保存条件:

编号

规格

储存条件

AK240-A

50ml×1 瓶

-20℃保存;用前 1 d 取出置于 4℃充分解冻后混匀。

AK240-B

粉剂×1 瓶

4℃保存;临用前加入 1100 μL AK240-D,充分溶解。

AK240-C

粉剂×1 瓶

4℃保存;临用前加入 1100 μL AK240-D,充分溶解。

AK240-D

50ml×1 瓶

4℃保存;

AK240-E

粉剂×1 瓶

4℃保存;临用前加入 2100μL AK240-D,充分溶解。

※ 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

自备用品:

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。

粗酶提取:

1. 组织:按照组织质量(g):AK240-A 体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL AK240-A)进行冰浴匀浆。16000rpm,4℃离心 40min,取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):AK240-A 体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500万细胞加入 1mL AK240-A),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间3min);然后 16000rpm,4℃,离心 40min,取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体:直接测定。

测定步骤:

1. 分光光度计预热 30min,调节波长到 340 nm,蒸馏水调零。

2. AK240-D 置于 40℃水浴中预热 30 min。

3. 在 1mL 石英比色皿中依次加入下列试剂

试剂名称

空白管 (μL)

测定管 (μL)

蒸馏水

100


AK240-B

20


AK240-C

20


AK240-D

820


AK240-E

40


迅速混匀后 340nm 处测定吸光值,记录第 30s 和 90s 时吸光值, 分别记录为A1 和 A2。△A 空=A1-A2。

上清液


100

AK240-B


20

AK240-C


20

AK240-D


820

AK240-E


40

迅速混匀后于 340nm 处测定吸光值,记录第 30s 和 90s 时吸光值,分别记录为A1 和 A2。△A 测=A3-A4。

注意:空白管只需测定一次

FAS 活性计算公式:

1. 按照蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1 μmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS (μmol/min/mg prot) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106]÷(Cpr×V 样)÷T=1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷Cpr

※ 蛋白定量检测建议使用本公司:BCA Protein Assay Kit (C05-02001)

2. 按照样本质量计算

活性单位定义:37℃中每克组织每分钟氧化 1 μmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS (μmol/min/g) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷W

3. 按细胞数量计算

活性单位定义:37℃中每 104个细胞每分钟氧化 1 μmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS (μmol/min/104cell) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106]÷(细胞数量×V 样÷V 样 总)÷T=1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷细胞数量

4. 按液体体积计算

活性单位定义:37℃中每毫升样本每分钟氧化 1 μmol NADPH 为 1 个酶活单位。

FAS (μmol/min/mL) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106]÷V 样÷T=1.61×(△A 测定管–△A 空白管)

注: ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V 反总:反应体系 总体积,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V 样:加入反 应体系中上清液体积,100μL=0.1 mL;T:反应时间,1min。

注意事项:

1. 配制好的试剂 4℃保存,三天内使用完毕。

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