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脂蛋白酯酶(LPL)检测试剂盒
脂蛋白酯酶(LPL)检测试剂盒图片
货号: AK237
包装: 100T/48S
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货号: AK237
半岛bd体育手机客户端 别名: Lipoprotein lipase Assay Kit
半岛bd体育手机客户端 介绍

意义:脂蛋白酯酶 (Lipoprotein lipase, LPL) 是脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、乳腺细胞及巨噬细 胞等实质细胞合成的一种酶,可催化甘油三脂水解为脂肪酸和单酸甘油酯,以供组织氧化供能和贮存,并 在不同的组织表现出不同的生理意义。

原理:脂蛋白酯酶水解 4-硝基苯棕榈酸酯产生 4-硝基苯酚,在 400nm 有特征吸收峰。

检测方法:微量法

半岛bd体育手机客户端 组成及保存条件:

编号

规格

储存条件

AK237-A

80mL×1 瓶

4℃保存;

AK237-B

粉剂×1 支

4℃避光保存;临用前加入 1ml 丙酮溶解备用

AK237-C

20ml×1 瓶

4℃保存;

AK237-标准品(5 μmol/mL)

1ml×1 瓶

4℃保存。

※ 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

自备用品:

天平、冷冻离心机、研钵、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰、丙酮和蒸馏水。

粗酶提取:

1. 组织:按照质量(g):AK237-A 体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL AK237- A)加入 AK237-A,冰浴匀浆后于 4℃,10000g 离心 10min,取上清置冰上待测。

2. 细胞:按照细胞数量(104 个):AK237-A 体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞 加入 1mL AK237-A)加入 AK237-A,冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒, 总时间 3min);然后于 4℃,10000g 离心10min,取上清待测。

3. 血清:直接测定。

测定步骤:

1. 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长到 400 nm,蒸馏水调零。

2. 将 5μmol/mL 标准液用 AK237-A 稀释 16 倍至 0.3125μmol/mL 的标准溶液备用。

3. 在 1.5mL 离心管中依次加入下列试剂:

试剂名称

对照管(μL)

测定管 (μL)

标准管(μL)

空白管(μL)

粗酶液

30

30



标准液



30


蒸馏水




30

AK237-A

120

108

120

120

AK237-B


12



混匀,45℃水浴10min

AK237-C

150

150

150

150

充分混匀放置 2min 后,对照管和测定管 8000g 常温离心 10min,取 200μL 对照 管和测定管的上清、标准管和空白管于微量玻璃比色皿/96 孔板中测定 400nm 处吸光值,记为 A 对照管、A 测定管、A 空白管、A 标准管,ΔA=A 测定管- A 对照管,ΔA 标准=A 标准管- A 空白管。

LPL 活性计算公式:

1、 血清(浆)LPL 活力计算:

单位定义:在 45℃,pH7.5 条件下,每毫升血清每分钟水解产生 1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL(U/mL)=ΔA÷(ΔA 标准÷C 标准)÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA 标准

2、 组织、细菌或细胞中 LPL 活力计算:

(1)按样本质量计算:

单位定义:在 45℃,pH7.5 条件下,每克组织每分钟水解产生 1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL(U/g 质量)=ΔA÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 提取÷W÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA 标准÷W

(2)按样本蛋白浓度计算:

单位定义:在 45℃,pH7.5 条件下,每毫克蛋白每分钟水解产生 1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL(U/mg prot)=ΔA÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 提取÷(V 提取×Cpr)÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA 标准÷Cpr

(3)按细菌或细胞数量计算:

单位定义:在 45℃,pH7.5 条件下,每 104 个细胞每分钟水解产生 1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单 位。

LPL(U/104 cell)=ΔA÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 提取÷500÷T×1000=0.0625×ΔA÷ΔA 标准

C 标准:标准溶液浓度,0.3125μmol/mL;V 提取:加入 AK237-A 体积,1mL;T:反应时间,10min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万;1000:单位换算 系数,1μmol=1000nmol。

注意事项:

1. AK237-C 加入混匀后静置两分钟立即测定,否则影响吸光值。

2. 测定管加入 AK237-B 后变浑浊为正常现象。

3. 吸光值过高或者测定结果不稳定,则将粗酶液进行适当的稀释,并在计算公式中乘以稀释倍数。

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