意义：腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 (ADP-glucose pyrophorylase, ADPase, AGP) (EC 2.7.7.21) 是植物合成淀粉和微生物合成糖原的一个限速酶，催化由 1-磷酸葡萄糖与 ATP 反应形成腺苷二磷酸葡萄 糖 (ADPG) 并释放能量的反应。了解 AGPase 对研究淀粉含量有重要的价值。

原理：腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 (AGPase) 催化 1-磷酸葡萄糖生成 ADPG。AGPase 催化逆向 反应生成 1-磷酸葡萄糖，添加磷酸已糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶，可生成 6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH。在 340nm 下测定 NADPH 增加速率，可计算出 AGPase 活性。

检测方法：可见分光光度法

半岛bd体育手机客户端 组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
提取液 ES36	60mL×1 瓶	4℃保存；
AK264-A	20mL×1 瓶	4℃保存；
AK264-B	粉剂×2 支	4℃保存；临用前每支加入 250μL 蒸馏水充分溶解备用； 剩余试剂仍 4℃保存；
AK264-C	粉剂×1 瓶	4℃保存；临用前加入 3mL 蒸馏水充分溶解备用； 剩余试剂仍 4℃保存；
AK264-D	粉剂×2 瓶	4℃保存；临用前每瓶加入 3mL 蒸馏水充分溶解备用； 剩余试剂仍 4℃保存；
AK264-E	粉剂×2 瓶	-20℃保存；临用前每瓶加入 3mL 蒸馏水充分溶解备用； 剩余试剂仍 -20℃保存；
AK264-F	粉剂×2 支	-20℃保存；临用前每支加入 250μL 蒸馏水充分溶解备用； 剩余试剂仍 4℃保存；
AK264-G	粉剂×2 支	-20℃保存；临用前每支加入 250μL 蒸馏水充分溶解备用； 剩余试剂仍 4℃保存；

※ 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

自备用品：

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：

按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1:5～10 的比例(建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液 ES36)，进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤

1. 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2. AK264-A 在 30℃水浴锅中预热 10 min 以上。

3. 在 1ml 玻璃比色皿中依次加入下列试剂 (如果一次性测定样本较多，可以将 AK264-A、B、C和 D 按比例配成混合液 1，将 AK264-A、E、F 和 G 按比例配成混合液 2)

试剂名称	测定管 (μL)
AK264-A	100

AK264-B	10
AK264-C	50
AK264-D	100
样本	20
混匀，30℃保温 15 min，置沸水浴中 1 min(盖紧，防止水分散失)，冰浴迅速冷却。
AK264-A	300
AK264-E	100
AK264-F	10
AK264-G	10
混匀后立即在 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2， 计算 ΔA=A2-A1。

AGP 酶活性计算公式：

1. 按样本蛋白蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。

AGP (nmol/min/mg prot) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T = 2813×ΔA÷Cpr

※ 蛋白定量检测建议使用本公司：BCA Protein Assay Kit (C05-02001)

2. 按照样本鲜重计算

单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

AGP (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W× V 样÷V 样总)÷T = 2813×ΔA÷W

注： V 反总：反应体系总体积，7×10^-4L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³L / mol /cm；d： 比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.02 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应 时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。