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组织无机磷检测试剂盒(100T)
组织无机磷检测试剂盒(100T)图片
货号: AK357
包装: 100T/96S
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货号: AK357
半岛bd体育手机客户端 别名: Tissue Inorganic Phosphorus Assay Kit(100T)
半岛bd体育手机客户端 介绍

意义:无机磷主要指磷酸根,参与生物体内多种代谢,包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱

磷酸化等等,此外促进碳水化合物的合成、转化和转运。

原理:钼蓝与磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物质,通过测定 660nm 光吸收,即可计算无机磷含 量。

检测方法:微量法

半岛bd体育手机客户端 组成及保存条件:

编号

规格

储存条件

AK357-A

100ml ×1 瓶

4℃保存;

AK357-B

5ml ×1 瓶

4℃保存;

AK357-C

粉剂 ×1 瓶

4℃避光保存。临用前配制,加入 10 mL 蒸馏水,充分溶

解后加入试 剂二(全部),混匀。

AK357-D

液体×1 支

标准品:1mmol/L 无机磷标准液,4℃保存。

※ 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

自备用品:

紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。

无机磷提取:

按照组织质量(g):AK357-A 体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL AK357- A)进行冰浴匀浆。10000rpm,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到660 nm,蒸馏水调零。

2. 打开水浴锅,调节温度到40℃。

3. 在 0.5mL EP 管中按列表中顺序加入上述试剂,

试剂名称

空白管 (ul)

标准管 (ul)

测定管 (ul)

上清液



10

标准品


10μL


蒸馏水

100

90

90

AK357-C

100

100

100

混匀后置于40℃水浴保温10min,室温冷却10 min 后于660 nm 测定吸光度,


记为:A 空白管。

记为:A 标准管

记为:A 测定管

注意:空白管和标准管只需测定一次。

组织无机磷含量计算:

1. 按照蛋白含量计算

无机磷含量 (mmol/mg prot) = [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总÷Cpr = 1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr

2. 按照样本质量计算

无机磷含量 (mmol/g ) = [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总÷W = 1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W

注: C 标准液:1mmol/L;V 总:上清液总体积,1mL=0.001 L;W:样品质量(g);

注意事项:

1. 试剂三需临用前配制,并且当天使用完毕。

2. 40min 内完成比色。

3. 最低检出限为 10μ mol/L。

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