意义：酸性木聚糖 (Acidic, ACX) (EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊 聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及 β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度， 促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿 造和饲料工业中，ACX 一般分离自耐酸的真菌，细菌及部分霉菌。

原理：ACX 在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步在沸水浴条件下与 3,5-二硝 基水杨酸发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比， 通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率，可计算 ACX 活力。

检测方法：微量法

半岛bd体育手机客户端 组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
AK157-ES29	液体 65ml×1 瓶	4℃保存
AK157-A	液体 10ml×1 瓶	4℃避光保存
AK157-B	液体 10ml×1 瓶	4℃避光保存

※ 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

自备用品：

天平、低温离心机、恒温水浴锅，可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

粗酶液提取：

1. 发酵液：发酵液于 8000g，4℃，离心 15min，取上清，作为待测样品。

2. 酶干粉：称约 0.1mg，加 1mL AK157-ES29 溶解待测。 测定操作：

1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 540 nm，蒸馏水调零。

2. 在 EP 管中按顺序加入下列试剂：

	对照管 (ul)	测定管 (ul)
样品	60	60
AK157-ES29	90	90
AK157-A		60
AK157-B	90
混匀，50℃水浴中反应 30min，立即沸水浴中 10min 灭活。(注意不要让盖子爆开，以免进水，改变了反应体系)
AK157-A	60
AK157-B		90
混匀，沸水浴中显色 5min (注意不要让盖子爆开，以免进水改变了反应体系)，取 200ul 于微量石英比色皿/96 孔板，对照管调零，测定 A540

计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y = 2.5554x - 0.002 ，R2 = 0.9983

1. 发酵液 ACX 活力计算：

酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶 量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX 活力(nmol/min/mL) = (A540+0.002)÷2.5554÷150÷T×稀释倍数×1000=435×(A540+0.002)

2. 酶干粉 ACX 活力计算：

酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为 一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX 活力 (nmol/min/mL) = (A540+0.002)÷2.5554÷150÷T×稀释倍数×1000÷W=435×(A540+0.002)÷W

注： 计算公式中：150：木糖的分子量，30：反应时间，5：稀释倍数(300ul÷60ul=5)，1000：转化因子，即 1mmol/L =1000μmol/L，W：样本质量，mg

b 用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y = 1.2777x - 0.002 ，R2 = 0.9983

1. 发酵液 ACX 活力计算：

酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的 酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX 活力 (nmol/min/mL) = (A540+0.002)÷1.2777÷150÷T×稀释倍数×1000= 870×(A540+0.002)

2. 酶干粉 ACX 活力计算：

酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量 为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX 活力 (nmol/min/mg) =(A540+0.002)÷1.2777÷150÷T×稀释倍数×1000÷W= 870×(A540+0.002 ) ÷W

注： 计算公式中：150：木糖的分子量；T：反应时间，30min；稀释倍数=V 反总÷V 样=300μL÷60μL=5；1000：转化因子，即 1mmol/L =1000μmol/L ；W：样本质量，mg

注意事项：

1. 吸光度变化应该控制在 0.01～0.8 之间，否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计 算的稀释倍数要相应改变。

2. 试剂盒 2-8℃保存，保质期 3 个月，建议尽快使用。