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葡萄糖氧化酶(GOD)活性检测试剂盒(100T)
葡萄糖氧化酶(GOD)活性检测试剂盒(100T)图片
货号: AK137
包装: 100T/96S
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货号: AK137
半岛bd体育手机客户端 别名: Glucose oxidase Assay Kit(100T)
半岛bd体育手机客户端 介绍

意义:葡萄糖氧化酶 (Glucose oxidase, GOD, GOx) (EC 1.1.3.4) 是一种存在于昆虫、真菌和细菌中的 酶,催化 D-葡萄糖氧化为 D-葡萄糖内酯。GOD 广泛应用于食品、饮料、化工、制药等行业。

原理:葡萄糖氧化酶催化产生 H2O2,过氧化物酶在有氧存在时催化 H2O2 分解产生的氧又将邻联茴香 胺氧化生成有色物质,颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。

检测方法:微量法

半岛bd体育手机客户端 组成及保存条件:

编号

规格

储存条件

提取液 ES20

液体 100mL×1 瓶

4℃保存;

AK137-A

液体 20mL×1 瓶

4℃保存;

AK137-B

液体 4mL×1 瓶

4℃保存;

AK137-C

液体 1mL×1 瓶

4℃保存;

工作液的配制:用前将 AK137-B 和 AK137-C 转移至 AK137-A 中,充分混匀,待用;

剩余试剂 4℃可保存一周;

※ 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

自备用品:

紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、天平、烘箱、玻璃管、离心机、可调式移 液枪、冰和蒸馏水。

样品准备:

1. 组织样品的制备:

组织处理:按照组织质量(g):提取液 ES20 体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组 织, 加入 1mL 提取液 ES20),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2. 血清(浆):直接检测。
测定步骤:

1. 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 500nm,蒸馏水调零。

2. 工作液的配制:用前将 AK137-B 和 AK137-C 转移至 AK137-A 中,充分混匀,待用;剩余试剂4℃可保存一周;

3. 测定前将工作液在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。

4. 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 240μL 工作液,立即混匀并计时,记录500nm 下 20s 吸光值 A1 和 1min 20s 后的吸光值 A2。计算 ΔA=A2-A1。

GOD 活力单位的计算:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 血清(浆)GOD 活力的计算

单位定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。

GOD (ol/min/mL) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T = 3333×ΔA

2. 动物组织 GOD 活力的计算

(1)按蛋白浓度计算

单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。

GOD (nmol/min/mg prot) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr)÷T = 3333×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。

GOD (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T = 3333×ΔA÷W

注: V 反总:反应体系总体积,2.5×10-4L;ε:氧化型邻联茴香胺摩尔消光系数,7.5×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

1. 血清(浆)GOD 活力的计算

单位定义:每mL 血清(浆)每分钟催化产生1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。

GOD (nmol/min/mL) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T = 6666×ΔA

2. 动物组织 GOD 活力的计算

(1)按蛋白浓度计算

单位定义:每mg 组织蛋白每分钟催化产生1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。

GOD (nmol/min/mg prot) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr)÷T = 6666×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位定义:每g 组织每分钟催化产生1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。

GOD (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T = 6666×ΔA÷W

注: V 反总:反应体系总体积,2.5×10-4L;ε:氧化型邻联茴香胺摩尔消光系数,7.5×103L / mol/cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

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