半岛bd体育手机客户端 介绍
意义：葡萄糖氧化酶 (Glucose oxidase, GOD, GOx) (EC 1.1.3.4) 是一种存在于昆虫、真菌和细菌中的 酶，催化 D-葡萄糖氧化为 D-葡萄糖内酯。GOD 广泛应用于食品、饮料、化工、制药等行业。 原理：葡萄糖氧化酶催化产生 H2O2，过氧化物酶在有氧存在时催化 H2O2 分解产生的氧又将邻联茴香 胺氧化生成有色物质，颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。 检测方法：微量法 半岛bd体育手机客户端 组成及保存条件：
※ 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。 自备用品： 紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、天平、烘箱、玻璃管、离心机、可调式移 液枪、冰和蒸馏水。 样品准备： 1. 组织样品的制备： 组织处理：按照组织质量(g):提取液 ES20 体积(mL)为 1:5～10 的比例(建议称取约 0.1g 组 织， 加入 1mL 提取液 ES20)，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 2. 血清(浆)：直接检测。 1. 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 500nm，蒸馏水调零。 2. 工作液的配制：用前将 AK137-B 和 AK137-C 转移至 AK137-A 中，充分混匀，待用；剩余试剂4℃可保存一周； 3. 测定前将工作液在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。 4. 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 240μL 工作液，立即混匀并计时，记录500nm 下 20s 吸光值 A1 和 1min 20s 后的吸光值 A2。计算 ΔA＝A2-A1。 GOD 活力单位的计算：a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1. 血清(浆)GOD 活力的计算 单位定义：每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。 GOD (ol/min/mL) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T = 3333×ΔA 2. 动物组织 GOD 活力的计算 (1)按蛋白浓度计算 单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。 GOD (nmol/min/mg prot) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr)÷T = 3333×ΔA÷Cpr (2)按样本鲜重计算 单位定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。 GOD (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T = 3333×ΔA÷W 注： V 反总：反应体系总体积，2.5×10-4L；ε：氧化型邻联茴香胺摩尔消光系数，7.5×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。 b. 用 96 孔板测定的计算公式如下1. 血清(浆)GOD 活力的计算 单位定义：每mL 血清(浆)每分钟催化产生1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。 GOD (nmol/min/mL) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T = 6666×ΔA 2. 动物组织 GOD 活力的计算 (1)按蛋白浓度计算 单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。 GOD (nmol/min/mg prot) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr)÷T = 6666×ΔA÷Cpr (2)按样本鲜重计算 单位定义：每g 组织每分钟催化产生1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。 GOD (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T = 6666×ΔA÷W 注： V 反总：反应体系总体积，2.5×10-4L；ε：氧化型邻联茴香胺摩尔消光系数，7.5×103L / mol/cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。 |
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