碱性磷酸酶检测试剂盒(Alkaline Phosphatase Assay Kit)是一种用于快速、便捷地检测细胞或组织样品的裂解或匀浆产物的上清液、血清、血浆、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性的试剂盒。
碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos)也称碱性磷酸酯酶(EC 3.1.3.1),可以在碱性条件下催化磷酸酯键的水解。哺乳动物中,肝脏、胆管、肾脏、骨头和胎盘中的碱性磷酸酶活性比较高。常见的碱性磷酸酶包括肠道碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, intestinal, ALPI)、非组织特异性碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, tissue-nonspecific isozyme, ALPL)和胎盘碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, placental type, 也称placental alkaline phosphatase, PLAP)。常见的小牛肠碱性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline Phosphatase, CIAP/CIP)被广泛用于二抗等的标记最终用于蛋白和核酸等的检测,也常用于DNA或RNA 5'和3'末端的去磷酸化(去单磷酸化),特别是质粒的5'末端去磷酸化以避免质粒自连等。
干细胞,如iPS中,碱性磷酸酶的活性很高,常被用作iPS成功诱导的标志。另外,分化的结肠癌细胞中碱性磷酸酶的活性也会显著升高,被当作结肠癌细胞分化程度定性和定量的指标。此外,血清中碱性磷酸酯酶的升高,被称作高碱性磷酸酶血症(hyperalkalinephosphatasemia),被认为和恶性胆管阻塞(malignant biliary obstruction)、原发性胆管硬化(primary biliary cirrhosis)、原发性硬化胆管炎(primary sclerosing cholangitis)、肝淋巴瘤(hepatic lymphoma)和肝肉瘤(hepatic sarcoidosis)等肝胆疾病密切相关。血清中碱性磷酸酶活性升高还和骨头生成密切相关,因为碱性磷酸酶是成骨细胞的副产物。血清中碱性磷酸酶活性过低也和一些疾病相关。儿童和孕妇血清中的碱性磷酸酶活性较普通人高一些。血清中碱性磷酸酶活性范围在20-140U/L。
除胎盘碱性磷酸酶(alkaline phosphatase placental isoform)以外,其它的内源性碱性磷酸酶加热后易失活。
检测原理:
Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)是一种常用的磷酸酶显色底物,在碱性条件下,可在碱性磷酸酶作用下生成para-nitrophenol。para-nitrophenol(p-nitrophenol)在碱性条件下,呈黄色产物,可以在400-415nm检测吸光度。产物黄色越深,说明碱性磷酸酶检活性越高,反之则酶活性越低。据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。
半岛bd体育手机客户端 特点:
本试剂盒可以检测细胞或组织样品的裂解或匀浆产物的上清液、血浆、血清、尿液或纯化的酶样品等中的碱性磷酸酶活性。
包括标准品和空白对照,本试剂盒共可进行100个样品的检测。
包装清单:
半岛bd体育手机客户端 编号 |
半岛bd体育手机客户端 名称 |
包装 |
P0321S-1 |
检测缓冲液 |
15ml |
P0321S-2 |
显色底物 |
2管 |
P0321S-3 |
p-nitrophenol溶液(10mM) |
0.1ml |
P0321S-4 |
反应终止液 |
12ml |
— |
说明书 |
1份 |
保存条件:
-20℃保存,一年有效。其中显色底物和p-nitrophenol溶液需避光保存。
注意事项:
如果希望进行酶活性的**定量,进行酶反应时必须注意精确计时。此时推荐采用孵育30分钟等较长的时间,以减小操作过程中的时间误差。同时如果样品中酶活性较高,则可以预先适当稀释样品。
样品溶液中须避免出现EDTA、氟离子、柠檬酸盐等碱性磷酸酶的抑制剂。
检测缓冲液和p-nitrophenol溶液对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。反应终止液有腐蚀性,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品。
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为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。