柱式病毒RNA提取试剂盒操作步骤：

1．如果有N个样品，标记N+2个1.5～2mL螺旋盖塑料离心管，多出的一个为阳性对照，一个为阴性对照。为避免污染，建议不要使用压盖式塑料离心管。在每个管上做个标记，以在后续操作时区别向心面和离心面。然后各加入0.2mL液体样品(血清、血浆、尿液、脑脊液、唾液、眼泪等等)。不同样品处理方法如下：

① 如果是口腔拭子、咽喉拭子等各种拭子样品，则将拭子放入0.2mL自备生理盐水中挤压出液体，然后取0.2mL进行提取。

② 如果是粪便等半固定样品，则取约0.3mL的样品，加入0.3mL自备生理盐水，震荡重悬，离心取0.2mL上清进行提取。

③ 如果血液，细胞培养液等含细胞的液体，可以离心用上清，也可以直接取用，但后者提取的RNA中有细胞的基因组DNA污染。血浆的抗凝剂必须是EDTA或ACD，不能是肝素。使用ACD时由于所加入ACD会增加体积，样品会被稀释，得到的病毒滴度会比使用EDTA低15%左右。血浆最好按0.6mL/管的量分装保存，以避免反复冻融。

④ 如果样品是实体组织或培养细胞，则需要在自备生理盐水中匀浆后离心，用0.2mL上清液(含病毒)进行提取，但此种情况下最后得到的RNA不可避免的会含有基因组DNA污染。

⑤ 如果液体样品中的病毒需要富集，可以使用1.5mL上述方法得到的液体在4℃条件下24,000g冷冻离心60分钟，移弃1.3mL、用剩下的0.2mL继续操作。

2．加入0.6mL RNA病毒裂解液，振荡30秒混匀后室温放置10分钟。

? 注意：RNA病毒裂解液在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。

3．加入0.8mL上柱结合液到离心管中，颠倒混匀后转移一半的混合液(0.8mL)到离心吸附柱中，室温放置2分钟。

4．12,000rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。

5．将剩余的另外一半裂解液(0.8mL)转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。

6．12,000rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。

7．加入0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000rmp室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。

8．加入0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000rmp室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。此为第二次洗涤，可以跳过。

9．12000g室温离心半分钟。

10．在离心吸附柱的滤膜的中部加入30-100μL RNA洗脱液，然后将离心吸附柱套入一新的1.5mL离心管中，室温放置2分钟。

11．12000g室温离心1分钟，离心管中收集的样品即为RNA。

12．RNA样品可以直接用于RT-PCR或逆转录反应，也可放-80℃长期保存。