猪PD-1elisa检测试剂盒实验用途:PD-1是近年新发现的一个负性共刺激信号分子,其配体为PD-L1和PD-L2,共属于CD28/B7家族。PD-1/PD-L通路削弱、限制和/或终止T细胞、B细胞和骨髓细胞的活化及外周炎症的效应器功能;二者相互作用导致T细胞增殖抑制和细胞因子IL-2、IL-10和IFN-γ的分泌下降,在移植免疫、自身免疫及肿瘤免疫等体系中发挥着重要作用。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂(ELISA)。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体,经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
操作技巧
1.操作前应对试验的物理参数有充分的了解,如环境温度(保持在18 C~25℃)、反应孵育温度和孵育时间、洗刷的次数等,要先查看水育箱温度,ELISA试剂盒是否符合要求。
2.正确使用加样器加样器应笔直参加标本或试剂,避免刮擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅,血清残留在反应孔壁上,加样器吸头要清洗干净,避免污染,加样次第要与说明书一起,否则可导致效果过错,试验重复性差。
3.手工洗板加洗液时冲击力不要太大,洗刷次数不要逾越说明书举荐的洗刷次数,洗液在反应孑L内停留的时间不宜太长。不要使洗液在孑L间窜流,形成孔问污染,导致假阴性或假阳性。
4.要保证加液量一起 我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好,滴瓶不易控制加液量禁绝,形成显色不一致,判别过错。
5.显色液量不可过多 加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下,加显色系统后要避光反应,显色液量不能过多,避免显色过强。